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電化學(xué)發(fā)光免疫測定(electrochemiluminescence immunoassay,，ECLl)是電化學(xué)發(fā)光(ECL)和免疫測定相結(jié)合的產(chǎn)物,。ECLI中標記物的發(fā)光原理與一般的化學(xué)發(fā)光(CL)不同，是一種在電極表面由電化學(xué)引發(fā)的特異性化學(xué)發(fā)光反應(yīng),，實際上包括了電化學(xué)和化學(xué)發(fā)光2個過程,。ECL與CL的差異在于ECL是電啟動發(fā)光反應(yīng)，而CL是通過化合物混合啟動發(fā)光反應(yīng),。在電化學(xué)發(fā)光免疫測定中應(yīng)用的標記物為電化學(xué)發(fā)光反應(yīng)的底物三聯(lián)吡啶釕，其衍生物N—羥基琥珀酰胺(NHS)酯可通過化學(xué)反應(yīng)與抗體或不同化學(xué)結(jié)構(gòu)的抗原分子結(jié)合,，制成標記的抗體或抗原,。ECLI的測定模式與ELISA相似，分2個步驟進行?，F(xiàn)以雙抗體夾心法測定TSH抗原為例介紹ECLI反應(yīng)原理,。

第1步：耦聯(lián)有活化的三聯(lián)吡啶釕衍生物即[Ru(bpy)3]2+N—羥基琥珀酰胺酯(NHS)的TSH抗體和結(jié)合了生物素的TSH抗體與待測血清同時加入一個反應(yīng)杯中孵育。

第2步：將被鏈霉親和素包被的磁珠加入反應(yīng)杯中,，再次孵育,，使生物素與親和素的結(jié)合，將磁珠,、TSH抗體連接為一體,，形成雙抗體夾心。

第3步,，蠕動泵將形成的[Ru(bpy)3]2+抗體—抗原—抗體—磁珠復(fù)合體吸人流動測量室,，此時，磁珠被工作電極下面的磁鐵吸附于電極表面,。同時,，游離的TSH抗體（與生物素結(jié)合的和與[Ru(bpy)3] 2+結(jié)合的抗體)也被吸出測量室。

緊接著,，蠕動泵加入含三丙胺(TPA)的緩沖液,，同時電極加電壓，啟動ECL反應(yīng)過程,。發(fā)光劑[Ru(bpy)3]2+和電子供體TPA在陽極表面,，可同時各失去一個電子而發(fā)生氧化反應(yīng)，使2價的[Ru(bpy)3] 2+被氧化成3價,，后者是一種強氧化劑,；另一方面,，TPA被氧化成陽離子自由基TPA…，后者很不穩(wěn)定,，可自發(fā)失去1個質(zhì)子(H+),，形成自由基TPA·，這是一種很強的還原劑,，可將1個電子給3價的[Ru(bpy)3)3] 2+,，使其形成激發(fā)態(tài)的[Ru(bpy)32+，而TPA自身被氧化成二丙胺和丙醛,。激發(fā)態(tài)的[Ru(bpy)3] 2+通過熒光衰減機制,，發(fā)射出一個波長620nm的光子，重新生成基態(tài)的[Ru(bpy)3] 2+,。該過程在電極表面周而復(fù)始地進行,，產(chǎn)生許多光子，光電倍增管檢測光強度,，光強度與[Ru(bpy)3] 2+的濃度呈線性關(guān)系,，故可測出待測抗原的含量。

ECLI具有以下優(yōu)點：①標記物可再循環(huán)利用,，使發(fā)光時間更長,，強度更高，易于測定,；②敏感度高,，可達pg/ml或pmol水平；③線性范圍寬,，可達>104單位,；④反應(yīng)時間短，20min以內(nèi)可完成測定,；⑤試劑穩(wěn)定性好,，2～5℃可保持1年以上。目前ECLI不僅可以應(yīng)用于所有的免疫測定,，而且還可用于DNA／RNA探針的檢測,。