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是采用色譜技術(shù)(TLC,、GC和HPLC)分離測定光學(xué)異構(gòu)體藥物的有效方法,。由于許多藥物的對映體(Enantiomer)之間在藥理、毒理乃至臨床性質(zhì)方面存在著較大差異,，有必要對某些手性藥物進(jìn)行對映體的純度檢查,。
 

（一）原理和方法：對映體化合物之間除了對偏振光的偏轉(zhuǎn)方向恰好相反外，其理化性質(zhì)是*相同的,，因而難以分離,。傳統(tǒng)方法（分步結(jié)晶法、酶消化法等）有很大局限性,，特別是難以進(jìn)行微量分離和測定,。60年代前后，TLC,、GC法逐漸用于對映體化合物的拆分,。但這兩種方法只能拆分不多的化合物，且需要較復(fù)雜的樣品處理步驟,，制備分離也難以進(jìn)行,。80年代初HPLC法迅速成為藥物對映體分離和測定為廣泛應(yīng)用的方法。
   

 HPLC用于手性分離概括起來可分為兩大途徑：間接(CDR)和直接(CMPA,、CSP)方法,。
 

    間接方法主要基于外消旋體混合物經(jīng)柱前衍生化形成一對非對映異構(gòu)體(Diastereoisomers)。此法又稱為非對映體拆分法或柱前手性衍生化法,。由于d-型和l-型對映體的物理性質(zhì)*相同,，只能在手性固定相上才能獲得拆分；如果利用對映體分子中的反應(yīng)基團(tuán)與某一光學(xué)純試劑反應(yīng)形成了非對映光學(xué)異構(gòu)體混合物,，其物理性質(zhì)就有較大的差異,，因而可在普通固定相（非手性固定相）上實(shí)現(xiàn)分離。本法需高光學(xué)純度的手性衍生化試劑(Chiral Derivatization Reagent,CDR),，衍生化反應(yīng)往往比較繁瑣費(fèi)時(shí),；各對映體衍生化反應(yīng)的速率有時(shí)也不相同。由于可采用價(jià)格便宜,、柱效較高的非手性柱和通過適當(dāng)?shù)难苌磻?yīng)可提高檢測的靈敏度,，以及衍生化過程中可伴隨樣品的純化等優(yōu)點(diǎn)，柱前手性衍生化的方法仍然是當(dāng)前手性藥物拆分,、尤其是生物樣品中藥物對映體分離和測定的常用方法,。   

     直接方法主要采用手性流動(dòng)相添加劑(Chiral Phase Additives,CMPA)法和手性固定相(CSP)法。CMPA法又可稱為手性流動(dòng)相(CMP)拆分法或手性洗脫法,。它不必事先將樣品制備成衍生物,，而只須將手性劑加入流動(dòng)相中。手性添加劑與樣品所形成的各種手性絡(luò)合物雖然不及CDR法所形成的衍生物那樣牢固,，但它所依據(jù)的手性識別作用和絡(luò)合物的非對映異構(gòu)體性質(zhì)卻基本相同,。常用的CMPA有：環(huán)糊精(Cyclodextrins)類（主要是α-,、β-和γ-環(huán)糊精及其衍生物）；手性離子對配合劑(Chiral Ion Pair Complex,CIPC),，如（+）-10-樟腦磺酸,、奎寧和奎尼丁等；以及配位體交換型手性流動(dòng)相添加劑(Chiral Ligand-exchange Complexes,CLEC),，其中手性配位體多為光活性氨基酸或其衍生物,，再與二價(jià)金屬離子形成螯合的配位化合物，以適當(dāng)?shù)臐舛确植加诹鲃?dòng)相中,，遇有藥物消旋體時(shí)即可形成相應(yīng)的非對映體配位化合物對,，然后在正相柱或反相柱上完成拆分。近年來CSP法發(fā)展迅猛,，應(yīng)用日益廣泛,。它是不經(jīng)轉(zhuǎn)變成非對映體而直接拆分的方法，優(yōu)點(diǎn)是：適用于不含活潑反應(yīng)基團(tuán)的化合物,；除非必須衍生化,，否則無需高光學(xué)純度試劑；樣品處理步驟簡單,。但迄今為止,，CSP柱商品已有40多種，價(jià)格大多昂貴,，尚未有一種具有類似ODS柱的普遍適用性,。根據(jù)分子結(jié)構(gòu)選擇合適的CSP柱是非常重要的。常用的CSP有：手性電荷遷移配位體固定相,，如 Pirkle型HPLC-CSP,；蛋白親和配體固定相，如 Enantiopac(LKB),；內(nèi)部配位化合固定相,，如環(huán)糊精(Cydobond)和纖維素酯(Chiracel)等；以及配基交換固定相,，如L-脯氨酸-Cu2+共價(jià)鍵合于聚苯乙烯等基質(zhì)上,。
     CSP拆分對映體的理論概念：在HPLC的CSP柱上拆分對映體是利用藥物對映體和特制的、在硅膠上鍵合的對映體固定相（CSP）之間所形成的非對映體復(fù)合物,。由于非對映體復(fù)合物穩(wěn)定性差異,，可使兩個(gè)對映體的保留時(shí)間不一致，與CSP形成穩(wěn)定性較差的非對映體的藥物對映體可先洗脫,，因之實(shí)現(xiàn)了拆分,。CSP設(shè)計(jì)是基于Dalgliesh在1952年提出的“三點(diǎn)手性識別模式”(Three-point chiral recognition model)，認(rèn)為要實(shí)現(xiàn)手性識別，在手性化合物分子與CSP之間至少同時(shí)要有三個(gè)相互作用部位,，其中之一必受空間影響,，或是相互吸引或是相互排斥。生成的非對映體的相對強(qiáng)度,，決定了兩個(gè)對映體的分離度和洗脫次序。
 

（二）三類手性分離方法的比較：CDR法的優(yōu)點(diǎn)是應(yīng)用條件相對簡易,，只需采用普通HPLC的固定相和流動(dòng)相即可而且通過衍生化有利于增加檢測（紫外或熒光）靈敏度,；缺點(diǎn)是樣品中相關(guān)化合物須預(yù)先分離、衍生化手性試劑的光學(xué)純度的高要求以及異體對的衍生化反應(yīng)速率不一,。
 

     CMPA法的優(yōu)點(diǎn)是不必作柱前手性衍生化,；對固定相也無特殊要求；樣品的非對映異構(gòu)化絡(luò)合具有可逆性而且利于制備,。主要缺點(diǎn)是可拆分的化合物范圍有限,；某些添加劑不夠穩(wěn)定而且往往會(huì)干擾檢測。
 

CSP法的優(yōu)點(diǎn)較多,，能廣泛適用于各類化合物,，適于常規(guī)及生物樣品的分析測定，制備分離方便,，定量分析的可靠性較高,，采用此法研究考察的化合物已達(dá)數(shù)千種之多。缺點(diǎn)是樣品有時(shí)也須作柱前衍生（但不一定是手性衍生化試劑）,，對樣品結(jié)構(gòu)有一定限制,，其適用性尚不及普通HPLC固定相（包括正相和反相）那樣廣泛。