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細(xì)胞培養(yǎng)中的無菌技術(shù)：

1. 實(shí)驗(yàn)進(jìn)行前，無菌室及無菌操作臺(laminar flow) 以紫外燈照射30-60 分鐘滅菌,，以70 % ethanol 擦拭無菌操作臺面,，并開啟無菌操作臺風(fēng)扇運(yùn)轉(zhuǎn)10 分鐘后，才開始實(shí)驗(yàn)操作,。每次操作只處理一株細(xì)胞株,，且即使培養(yǎng)基相同亦不共享培養(yǎng)基，以避免失誤混淆或細(xì)胞間污染,。實(shí)驗(yàn)完畢后,，將實(shí)驗(yàn)物品帶出工作臺，以70 % ethanol 擦拭無菌操作臺面,。操作間隔應(yīng)讓無菌操作臺運(yùn)轉(zhuǎn)10分鐘以上后,，再進(jìn)行下一個細(xì)胞株的操作。

2. 無菌操作工作區(qū)域應(yīng)保持清潔及寬敞,，必要物品,，例如試管架、吸管,、吸取器或吸管盒等可以暫時放置,，其它實(shí)驗(yàn)用品用完即應(yīng)移出，以利于氣流之流通,。實(shí)驗(yàn)用品以70 % ethanol 擦拭后才帶入無菌操作臺內(nèi),。實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在臺面的中央無菌區(qū)域，勿在邊緣的非無菌區(qū)域操作,。

3. 小心取用無菌的實(shí)驗(yàn)物品,，避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或容器瓶口,，亦不要在打開的容器正上方操作實(shí)驗(yàn),。容器打開后，以手夾住瓶蓋并握住瓶身,，傾斜約45° 角取用,，盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面,。

4. 工作人員應(yīng)注意自身的安全，須穿戴實(shí)驗(yàn)衣及手套后才進(jìn)行實(shí)驗(yàn),。對于來自人類或是病毒感染的細(xì)胞株應(yīng)特別小心操作,，并選擇適當(dāng)?shù)燃壍臒o菌操作臺(至少Class II)。操作過程中,，應(yīng)避免引起aerosol 的產(chǎn)生,，小心毒性藥品，例如DMSO 及TPA 等,，并避免尖銳針頭的傷害等,。

5. 定期檢測下列項(xiàng)目：

5.1. CO2 鋼瓶的CO2 壓力

5.2. CO2 培養(yǎng)箱的CO2 濃度、溫度,、及水盤是否有污染(水盤的水用無菌水,，每周更換)。

5.3. 無菌操作臺內(nèi)的airflow 壓力,，定期更換紫外線燈管及HEPA 過濾膜,，預(yù)濾網(wǎng)(300小時/預(yù)濾網(wǎng)，3000 小時/HEPA),。

6. 水槽可添加消毒劑(Zephrin 1:750),，定期更換水槽的水。