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不管黑貓白貓,，抓到老鼠就是好貓,，對純化來講亦如此，能拿到純度好的蛋白,，符合純化要求就是硬道理,。不同蛋白純化工藝不同，即使相同的原料也有不同的純化方案,。蛋白質純化方法的選擇主要是利用不同蛋白質之間的相似性與差異,，依據(jù)蛋白之間的相似性可以去除非蛋白物質，在根據(jù)蛋白的差異性將目的蛋白分離出來,，所以要取得好的純化結果所可以采用的策略及原則卻是共通的,。

1. 針對不同的產物表達形式采用不同的策略：

a) 融合型表達重組蛋白，一般胞內可溶性的,，擬選用親和層析進行純化,；

b) 分泌型表達的重組蛋白，通常體積大,、濃度低，因此應在純化之前采用沉淀或超濾等方法先進行濃縮處理,；

c) 包涵體型表達的重組蛋白,，應先離心回收包涵體；

d) 表達在細胞膜和細胞壁之間的間隙中的蛋白質,，應用低濃度的溶菌酶,，然后再用滲透壓休克法釋放重組蛋白。

2. 針對不同性質的重組蛋白選擇不同的層析類型：

a) 離子交換法（IEX）：等電點處于區(qū)域（PI≤5 或 PI≥8）的重組蛋白應選 IEX 進行分離,，這樣很容易除去幾乎所有的雜蛋白,。

b) 親和層析（AC）：重組蛋白特異性的配體、底物,、抗體,、糖鏈等都是親和層析純化的重要條件，原則是它們與目的蛋白之間的解離常熟應在合適的范圍內（10-8—10-4mol/L）

c) 疏水（HIC）和反相層析：根據(jù)蛋白質的疏水性差異進行分離的,。

d) 凝膠過濾層析（GF）: 根據(jù)蛋白的分子量進行分離,。

3. 每一種方法都有分辨率,、處理量、速度和回收率之間的平衡：

a) 分辨率：由選擇的方法和層析介質生成窄峰的能力來完成,。當雜質和目的蛋白性質相似是,，在純化的zui后階段分辨率是選擇層析方法的重要考量標準。

b) 處理量：指在純化過程中目標蛋白的上樣體積和濃度等,。

c) 速度：在初純化中是重要因素,，此時雜質如蛋白酶必須盡快去除。

d) 回收率：隨著純化的進行漸趨重要,，因為純化產物的價值在增加,。

4. 多種分離純化技術聯(lián)合運用：

a) 選能除去含量zui多雜質的方法；

b) 盡量選擇的分離方法,；

c) 將zui費時,、成本zui高的分離純化方法安排在zui后階段。

d) 通過組合各種方法使純化步驟之間的樣品處理減至zui少,，以避免需要調節(jié)樣品,。*個步驟的產物的洗脫條件應適宜下一個步驟的起始條件。

e) 如果對目的蛋白的性質了解甚少的情況下,，可采用 IEX-HIC-GF 的聯(lián)合運用作為標準方案,。 常用層析方法的分離特點：

5. 重組蛋白分離純化的共同參考階段：

a) 捕獲階段：目的蛋白的澄清、濃縮和穩(wěn)定,。選擇對目的蛋白具有zui高選擇性或/和處理量的方法,。

b) 中度純化階段：目標是除去大多數(shù)大量雜質，如其它蛋白,、核酸,、內毒素和病毒等。

c) 精純階段：除去殘余的痕量雜質和必須去除的雜質,。

三階段純化策略中每一種方法的適用性：