直接滴定法測還原糖
1. 實驗原理
實驗經(jīng)除去蛋白質(zhì)后,,在加熱條件下,以亞甲基藍(lán)為指示劑,,滴定標(biāo)定過的堿性酒石酸銅溶液(用還原糖標(biāo)準(zhǔn)溶液標(biāo)定),,根據(jù)樣品液消耗體積計算還原糖含量。
2. 實驗藥品與試劑
硫酸銅,、亞甲基藍(lán)指示劑,、酒石酸鉀鈉、氫氧化鈉,、乙酸鋅,、冰乙酸、亞鐵氰hua鉀,、葡萄糖,、氫氧化鈉溶液(40g/L)
堿性酒石酸銅甲液:稱取15g硫酸銅及0.05g亞甲藍(lán)加適量水溶解至1000ml 堿性酒石酸銅乙液:稱取50g酒石酸鉀鈉與75g氫氧化鈉,加適量水溶解,,再加4g亞鐵氰hua鉀,,*溶解后稀釋至1000ml,貯存于橡膠塞玻璃瓶中,。 鹽酸溶液:量取50ml鹽酸加水稀釋至100ml,。
葡萄糖標(biāo)液:稱取1.0g干燥2h后的葡萄糖,加水溶解并加入5ml鹽酸,并以水稀釋到1000ml,,此溶液每毫克相當(dāng)于1.0mg葡萄糖,。
3.儀器
25ml滴定管、250 ml容量瓶,、150ml錐形瓶,、玻璃珠、 真空泵,、電子天平,、可調(diào)電爐(帶石棉板)
4.實驗步驟
4.1 樣品處理:
一般食品是稱取粉碎后的樣品2.5~5g或吸取5~25g液體樣品,置于250 ml容量瓶中,,加50ml水,,搖勻。加入5ml 乙酸鋅溶液及5ml亞鐵氰hua鉀溶液,,加水至刻度,,混勻,。靜置30min,用干燥濾紙過濾,,棄去初濾液,,濾液備用。
4.2標(biāo)定堿性酒石酸銅溶液:
吸取5.0g堿性酒石酸銅甲液及乙液,,于150ml錐形瓶中 加水10ml,加入玻璃珠兩粒,,從滴定管滴加約9ml葡萄糖或其他還原糖標(biāo)液,控制在2min內(nèi)加熱至沸,,趁熱以1滴/2s的速度繼續(xù)滴加葡萄糖或其他還原糖標(biāo)液至藍(lán)色剛好褪去,,即為終點(diǎn),記錄消耗體積,,平行測定3次并取平均值,,計算每10ml酒石酸銅溶液(甲、乙各5ml)相當(dāng)于多少葡萄糖或其他還原糖的質(zhì)量(mg),。
4.3試樣溶液預(yù)測:
吸取5.0g堿性酒石酸銅甲液及乙液,,于150ml錐形瓶中 加水10ml,加入玻璃珠兩粒,控制在2min內(nèi)加熱至沸,,保持沸騰以先快后慢的速度,,從滴定管中滴加試樣溶液,病保持溶液沸騰狀態(tài),,待溶液顏色變淺時,,以1滴/2秒的速度滴定,直至藍(lán)色剛好褪去即為終點(diǎn),,記錄樣液消耗體積。
4.4樣品測定:
吸取5.0g堿性酒石酸銅甲液及乙液,,于150ml錐形瓶中 加水10ml,加入玻璃珠兩粒,,從滴定管滴加比預(yù)測體積少1ml的試樣溶液至錐形瓶中,使在2min內(nèi)加熱至沸,,保持沸騰繼續(xù)以1滴/2秒的速度滴定,,直至藍(lán)色剛好褪去即為終
點(diǎn),記錄樣液消耗體積,,平行測定3次,,得出平均消耗體積。
5.計算
式中:
X—樣品中還原糖的含量(g/100g)
V—測定用樣品時平均消耗溶液的體積(ml) m—試樣質(zhì)量(g)
m1—堿性酒石酸銅溶液相當(dāng)于某種還原糖的質(zhì)量(mg)