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免疫組化常用方法介紹
1 ,、定義
用標(biāo)記的特異性抗體對(duì)組織切片或細(xì)胞標(biāo)本中某些化學(xué)成分的分布和含量進(jìn)行組織和細(xì)胞原位定性、定位或定量研究,，這種技術(shù)稱為免疫組織化學(xué)（immunohistochemistry）技術(shù)或免疫細(xì)胞化學(xué)（immunocytochemistry）技術(shù),。
2 、原理
根據(jù)抗原抗體反應(yīng)和化學(xué)顯色原理,，組織切片或細(xì)胞標(biāo)本中的抗原先和一抗結(jié)合,，再利用一抗與標(biāo)記生物素、熒光素等的二抗進(jìn)行反應(yīng),，前者再用標(biāo)記辣根過氧化物酶（HRP）或堿性磷酸酶（AKP）等的抗生物素（如鏈霉親和素等）結(jié)合,，zui后通過呈色反應(yīng)或熒光來顯示細(xì)胞或組織中化學(xué)成分，在光學(xué)顯微鏡或熒光顯微鏡下可清晰看見細(xì)胞內(nèi)發(fā)生的抗原抗體反應(yīng)產(chǎn)物,，從而能夠在細(xì)胞爬片或組織切片上原位確定某些化學(xué)成分的分布和含量,。
3 、分類
1）按標(biāo)記物質(zhì)的種類,，如熒光染料,、放射性同位素、酶（主要有辣根過氧化物酶和堿性磷酸酶）,、鐵蛋白,、膠體金等，可分為免疫熒光法,、放射免疫法,、免疫酶標(biāo)法和免疫金銀法等。 2）按染色步驟可分為直接法（又稱一步法）和間接法（二步,、三步或多步法）,。與直接法相比，間接法的靈敏度提高了許多,。
3）按結(jié)合方式可分為抗原-抗體結(jié)合,，如過氧化物酶-抗過氧化物酶（PAP）法；親和連接,，如卵白素-生物素-過氧化物酶復(fù)合物（ABC）法,、鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結(jié)（SP）法等，其中 SP 法是比較常用的方法,；聚合物鏈接,，如即用型二步法，此方法尤其適合于內(nèi)源性生物素含量高的組織抗原檢測,。
4 ,、目前幾種常用免疫組化方法簡單介紹 1）免疫熒光方法
是zui早建立的免疫組織化學(xué)技術(shù)。它利用抗原抗體特異性結(jié)合的原理,，先將已知抗體標(biāo)上熒光素,，以此作為探針檢查細(xì)胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原，在熒光顯微鏡下觀察,。當(dāng)抗原抗體復(fù)合物中的熒光素受激發(fā)光的照射后即會(huì)發(fā)出一定波長的熒光,，從而可確定組織中某種抗原的定位，進(jìn)而還可進(jìn)行定量分析,。由于免疫熒光技術(shù)特異性強(qiáng),、靈敏度高、快速簡便,，所以在臨床病理診斷,、檢驗(yàn)中應(yīng)用較廣。
2）免疫酶標(biāo)方法
免疫酶標(biāo)方法是繼免疫熒光后，于 60 年代發(fā)展起來的技術(shù),?；驹硎窍纫悦笜?biāo)記的抗體與組織或細(xì)胞作用，然后加入酶的底物,，生成有色的不溶性產(chǎn)物或具有一定電子密度的顆粒,，通過光鏡或電鏡，對(duì)細(xì)胞表面和細(xì)胞內(nèi)的各種抗原成分進(jìn)行定位研究,。免疫酶標(biāo)技術(shù)是目前zui常用的技術(shù),。
本方法與免疫熒光技術(shù)相比的主要優(yōu)點(diǎn)是：定位準(zhǔn)確，對(duì)比度好,，染色標(biāo)本可長期保存,，適合于光、電鏡研究等,。
免疫酶標(biāo)方法的發(fā)展非常迅速,，已經(jīng)衍生出了多種標(biāo)記方法，且隨著方法的不斷改進(jìn)和創(chuàng)新,，其特異性和靈敏度都在不斷提高,，使用也越來越方便。目前在病理診斷中廣為使用的有 ABC 法,、SP 三步法,、即用型二步法檢測系統(tǒng)等。