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微生物實驗室無菌操作技術(shù)規(guī)范
1. 目的
規(guī)范無菌操作流程,，減少及避免發(fā)生染菌現(xiàn)象出現(xiàn),。
2. 使用范圍
無菌室及潔凈區(qū)的操作。
3. 無菌操作技術(shù)原則
3.1 環(huán)境要清潔,，在每次無菌操作結(jié)束后都需要對環(huán)境進行清理,、清洗；且避免操作前進行
清掃,。
3.2 做好個人衛(wèi)生,，進入無菌室前需修剪指甲、洗手,，穿好無菌服,，帽子需遮住所有頭發(fā)，
口罩遮住口鼻,。
3.3 在無菌操作時,，不可講話，打噴嚏,，對懷疑染菌的無菌物品,，不可使用。
4. 內(nèi)容
4.1.1準(zhǔn)備：工作人員著裝整潔,，洗手,、戴口罩、修剪指甲,；備齊用物（如：接種針,、接種環(huán)、酒精燈,、斜面,、平皿、搖瓶,、75%酒精棉,、無菌水等）,；核對無菌用品，接種菌種的種類,、型號,。
4.1.2 所有實驗使用的物品都需要進行消毒、滅殺,；進入潔凈區(qū)前需要經(jīng)傳遞窗進行紫外表面消毒30min以上,；
4.1.3 開始實驗前需要打開超凈臺的紫外燈，消毒半個小時以上,；超凈臺避免放入過多的物品（一般只放入當(dāng)次的實驗所有的物品）,，所使用的試劑和耗材都需事先進行滅菌（滅菌日期超過4天的需重新消毒）。
4.1.4 進入潔凈區(qū)前關(guān)閉紫外燈,，并打開風(fēng)機,，等待半個小時以上，使臭氧盡量排放干凈,。 4.1.5 除去手腕等部位的飾品,，穿好無菌服，戴好頭套,、口罩,，做到“三不漏”：不暴漏頭發(fā)，不暴漏口鼻,，不暴漏軀干皮膚和衣物,。 4.1.6雙手要進行清洗、消毒,。
4.1.7要經(jīng)風(fēng)淋室風(fēng)淋30秒后再進入潔凈室,。 4.1.8在局部百級區(qū)域操作要戴一次性無菌手套。 4.1.9 實驗操作過程中應(yīng)盡量減少進入潔凈區(qū)的人員（不超過4人/間）并盡量減少人員走動,。 4.1.10 所有要放入超凈工作臺的物品都需進過消毒液噴灑擦拭消毒,。
4.1.11無菌物品若取離超凈臺則視為已污染，不得放回再用,；無菌液體在取離超凈臺前必須密封其開口,；密封的無菌液體容器在放入超凈臺后，對其開口前須對開口在酒精燈火焰上燒烤,。
4.1.12在拆開任何一次性無菌使用耗材的包裝時都要在超凈臺內(nèi)完成,，并須同時保證與細菌直接接觸的使用端/面不得與超凈臺內(nèi)的任何物品發(fā)生觸碰。 4.1.13工作臺面上的用品要放置有序,、布局合理,，一般說酒精燈（當(dāng)工作不需要時也可不用）在中間，右手使用的物品在右側(cè)，左手使用的物品在左側(cè),。工作時忌忙亂而要有序,。 4.1.14 開始操作前先用醫(yī)用酒精對雙手進行消毒。 4.1.15點燃潔凈工作臺內(nèi)的酒精燈,，在打開/關(guān)閉試劑瓶口,、試管口時應(yīng)將瓶口或者試管口過火；接種針,、接種環(huán)在使用前或在與臺面發(fā)生碰觸后應(yīng)經(jīng)過火焰的灼燒；接種針/接種環(huán)過火操作方法為：使其頭部到身部反正面在火焰上各烤燎通紅,；燒過的器械要冷卻后才能使用,，以免對細菌造成損傷。
4.1.16操作前試管（或搖瓶）口需要在火焰上方反轉(zhuǎn)鐐銬兩周,。 4.1.17操作時左手拿試管（或搖瓶）,，右手拇指、食指,、中指操作接種針（接種環(huán)）,，右手小指和無名指夾住瓶塞，取下瓶塞,，瓶塞再反轉(zhuǎn)鐐銬兩周后開始操作,。 4.1.18在超凈臺內(nèi)，盡量避免瓶口長時間敞開直立,。
4.1.19蓋封瓶口時,，應(yīng)將瓶口和瓶蓋內(nèi)面各自在火焰上燎烤兩周再蓋上瓶蓋。
4.1.20實驗用膠塞,、橡皮乳頭等橡膠和塑料用品在過火焰時也不能時間過長,，以免燒焦產(chǎn)生有毒氣體，危害培養(yǎng)的細胞,。 4.2 無菌液體標(biāo)準(zhǔn)轉(zhuǎn)移程序：
4.2.1無菌液體的轉(zhuǎn)移須在超凈臺進行,，轉(zhuǎn)移過程要盡量保持密閉，必須用移液管或移液器來完成操作,；
4.2.2 移液管上方口應(yīng)塞入棉絮（脫脂棉）,，用牛皮紙包好進行消毒滅殺；
4.2.3無菌液體瓶再封口時,，須將瓶口和瓶蓋分別燎烤2周后再封蓋,；封蓋后須貼上相應(yīng)的標(biāo)簽；
4.2.4在使用移液管轉(zhuǎn)移液體時,，應(yīng)保證移液管距移液器邊緣1cm以上,；在使用移液管時，每次液體吸入量不應(yīng)超過移液管的警示標(biāo)記,，更不能觸及移液管上方的防塵棉絮,；在使用移液管移出廢液時,，移液管應(yīng)距廢液缸5cm以上；在將細胞懸液轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶中時,，移液管應(yīng)距培養(yǎng)瓶0.5cm以上,；
4.2.5放置吸管時管口應(yīng)向下傾斜，以防液體倒流入橡皮乳頭內(nèi)而引起污染或者損壞電動移液槍,；
4.2.6向離心管,、細胞凍存管、培養(yǎng)瓶,、培養(yǎng)皿內(nèi)添加液態(tài)物質(zhì)時,，所加入的量不應(yīng)超過管上所標(biāo)示的zui大量；
4.2.7實驗人員在操作時,，應(yīng)保證開口離心管或開口試劑的上方為不可逾越區(qū),；嚴(yán)格禁止采用雙臂交叉的方式來拿取尚在開口狀態(tài)的離心管或試劑瓶；在面向操作臺工作時勿大聲講話或咳嗽,，以免噴出的唾沫把細菌帶入工作臺面發(fā)生污染,；
4.2.8在使用細胞刮刀時，手握部位應(yīng)盡量遠離培養(yǎng)瓶口,，以防污染,；
4.2.9如果在轉(zhuǎn)移任何液態(tài)物質(zhì)的過程中出現(xiàn)滴漏，則應(yīng)立即使用消毒液浸泡的棉球或紗布擦凈,；
4.2.10使用完畢的實驗耗材應(yīng)在*時間內(nèi)處理完畢,，避免堆積在超凈臺內(nèi)或?qū)恿髡稚希苑牢廴荆?nbsp;
4.2.11當(dāng)所有操作完成后,，應(yīng)及時使用消毒液對臺面進行清理,；擦拭完畢后再開啟紫外燈照射一個小時。