外泌體（exosome），特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡,。其主要來(lái)源于細(xì)胞內(nèi)內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體，經(jīng)多囊泡體外膜與細(xì)胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中?，F(xiàn)已證實(shí)可以分泌外泌體的細(xì)胞有：肥大細(xì)胞,、淋巴細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞,、腫瘤細(xì)胞,、間充質(zhì)干細(xì)胞等,。 
外泌體在免疫中抗原呈遞、腫瘤的生長(zhǎng)與遷移,、組織損傷的修復(fù)等生理病理上起著重要的作用,。同時(shí)，不同細(xì)胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能,，可作為疾病診斷的生物標(biāo)志物,。 
外泌體（Exosome）發(fā)現(xiàn)于1986年，是一種直徑約30~100nm的雙層膜囊泡狀結(jié)構(gòu)小體,，可由機(jī)體內(nèi)多種細(xì)胞如免疫細(xì)胞,、干細(xì)胞、心血管細(xì)胞,、網(wǎng)織紅細(xì)胞,、血小板、神經(jīng)細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞等主動(dòng)分泌產(chǎn)生,，廣泛分布于外周血,、尿液、唾液,、乳汁,、腹水、羊水等體液中,。   
外泌體攜帶大量特異性的蛋白質(zhì)（如細(xì)胞因子,、生長(zhǎng)因子）以及功能性的mRNAs、miRNAs等生物活性物質(zhì),，在體內(nèi)參與細(xì)胞通訊,、細(xì)胞遷移、促血管新生和抗腫瘤免疫等生理過(guò)程,，與多種疾病的發(fā)生和進(jìn)程密切相關(guān),。由于外泌體的特殊結(jié)構(gòu)和功能，使得它具有潛在的應(yīng)用價(jià)值,，一方面可以作為診斷多種疾病的生物指標(biāo),，另一方面也可以作為治療手段，未來(lái)有可能作為藥物的天然載體用于臨床治療,。  
外泌體的分離純化一直是科研工作者關(guān)注的問(wèn)題,，獲得高純度的外泌體對(duì)后續(xù)的研究至關(guān)重要。據(jù)了解,，目前人們多采用超速離心,、免疫磁珠、超濾,、沉淀或試劑盒等方法實(shí)現(xiàn)外泌體的提取分離： 
  
1,、超速離心法（差速離心）  
超離法是zui常用的外泌體純化手段,，采用低速離心、高速離心交替進(jìn)行（如圖所示）,，可分離到大小相近的囊泡顆粒,。超離法因操作簡(jiǎn)單，獲得的囊泡數(shù)量較多而廣受 歡迎,，但過(guò)程比較費(fèi)時(shí),，且回收率不穩(wěn)定（可能與轉(zhuǎn)子類型有關(guān)），純度也受到質(zhì)疑,；此外,，重復(fù)離心操作還有可能對(duì)囊泡造成損害，從而降低其質(zhì)量,。 
 
2,、密度梯度離心  
在超速離心力作用下，使蔗糖溶液形成從低到高連續(xù)分布的密度階層,，是一種區(qū)帶分離法,。通過(guò)密度梯度離心，樣品中的外泌體將在1.13-1.19g/ml的密度范圍富集,。此法獲得的外泌體純度較高,，但步驟繁瑣，耗時(shí),。  
 

3,、超濾離心  
由于外泌體是一個(gè)大小約幾十納米的囊狀小體，大于一般蛋白質(zhì),，利用不同截留相對(duì)分子質(zhì)量(MWCO)的超濾膜對(duì)樣品進(jìn)行選擇性分離,，便可獲得外泌體。超濾離心法簡(jiǎn)單,，且不影響外泌體的生物活性,，是提取細(xì)胞外泌體的一種新方法。   
 

4,、磁珠免疫法  
外泌體表面有其特異性標(biāo)記物（如CD63,、CD9蛋白），用包被抗標(biāo)記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結(jié)合,，即可將外泌體吸附并分離出來(lái),。磁珠法具有特異性高、操作簡(jiǎn)便,、不影響外泌體形態(tài)完整等優(yōu)點(diǎn),，但是效率低，外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響,，不利于下游實(shí)驗(yàn),，難以廣泛普及。   
 

5,、PEG-base沉淀法  
聚乙二醇（PEG）可與疏水性蛋白和脂質(zhì)分子結(jié)合共沉淀,，早先應(yīng)用于從血清等樣本中收集病毒，現(xiàn)在也被用來(lái)沉淀外泌體,，其原理可能與競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合游離水分子有關(guān),。利用PEG沉淀外泌體存在不少問(wèn)題：比如純度和回收率低，雜蛋白較多（假陽(yáng)性）,，顆粒大小不均一,，產(chǎn)生難以去除的聚合物，機(jī)械力或者吐溫-20等化學(xué)添加物將會(huì)破壞外泌體等,，因此發(fā)表文章時(shí)易受質(zhì)疑,。       
 

6、試劑盒提取  
近幾年來(lái),，市場(chǎng)上已出現(xiàn)各種商業(yè)化的外泌體提取試劑盒,，有的是通過(guò)特殊設(shè)計(jì)的過(guò)濾器過(guò)濾掉雜質(zhì)成分，有的則采用空間排阻色譜法(SEC)進(jìn)行分離純化,，也有的則利用化合物沉淀將法外泌體沉淀出來(lái),。這些試劑盒不需要特殊設(shè)備，隨著產(chǎn)品不斷更新?lián)Q代,，提取效率和純化效果逐漸提高,，因而逐漸取代超速離心法并推廣開來(lái)。有些試劑盒操作簡(jiǎn)便,，不用超速離心,，同時(shí)可獲得高純度和高回收率的外泌體，可分別針對(duì)尿液,、血液,、細(xì)胞上清液等多種樣品進(jìn)行提取，并可進(jìn)一步從外泌體中獲得想要的蛋白質(zhì)或者RNA分子,，方便快速,，因而受到大多數(shù)人的歡迎，并發(fā)表了不少高質(zhì)量的文章,！