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PCR,,中文譯為聚合酶鏈式反應,其實是一種DNA的快速擴增技術,,其擴增效率之高就象核裂變的“鏈式反應”那樣。PCR技術通過兩個短的稱為引物的DNA小片段和一種耐熱的酶的作用,。
梯度PCR儀把一次性PCR擴增可以設置一系列不同的退火溫度條件(溫度梯度),,通常有12種溫度梯度,這樣的儀器就叫梯度PCR儀,。因為被擴增的不同DNA片段,,其適退火溫度是不同的,通過設置一系列的梯度退火溫度進行擴增,,從而一次性PCR擴增,,就可以篩選出表達量高的適退火溫度,進行有效的擴增,。主要用于研究未知DNA退火溫度的擴增,,這樣節(jié)約成本的同時也節(jié)約了時間。主要用于科研,,教學機構,。梯度PCR儀,,在不設置梯度的情況下也可以做普通PCR擴增。具有雙槽梯度的不多,,領成具備此功能,。
梯度PCR儀溫度控制指標包括哪三個方面?
1,、溫度的準確性:是指樣品孔溫度與設定溫度的一致性,,它直接關系到實驗的成敗。由于PCR是一個幾何級數(shù)擴增的過程,,不論是變性,、退火還是延伸都需要準確控制溫度,對退火溫度而言溫控顯的尤為重要,,有時1°甚至0.5°的差異也能決定實驗的成功與失敗,,所謂差之毫厘,謬之千里,。因而對PCR擴增儀而言溫度控制就意味著質量,。
2、溫度的均一性:是指樣品孔間的溫度差異,,它關系到在不同樣品孔進行反應結果的一致性,。有用戶發(fā)現(xiàn)用同樣的樣品,同樣的PCR反應程序,,后的結果竟然差異非常明顯,,或許就是因為不同位置的溫度不均勻所致。同時位置邊緣效應對PCR實驗可重復性影響非常明顯,。
3,、升降溫速率:更快的升降溫速度,可以縮短反應進行的時間,,而且縮短了可能的非特異性結合,、反應的時間,能提高PCR反應的特異性,。