動物源食品中硝基呋喃類代謝物殘留檢測的固相萃取方法

（PolyClean X-HLB）

一,、實驗目的

本法為以 Polyclean X-HLB（60mg/3mL）柱開發(fā)的針對動物源食品（豬肉、牛肉,、雞肉,、豬肝和水產品）中硝基呋喃類代謝物殘留檢測的樣本前處理凈化方法，Polyclean  X-HLB

（60mg/3mL）柱凈化效果良好,，回收率滿足測試要求,，重現(xiàn)性好，與廠商同型號柱性能相當,。目標物采用反相液相色譜-紫外為檢測手段,。

二、實驗目標物

四種硝基呋喃類代謝物：呋喃它酮代謝物 5-嗎啉甲基-3-氨基-2-噁唑烷基酮（AMOZ,， CAS:43056-63-9）,、呋喃西林代謝物氨基脲（縮寫 SEM，CAS:563-41-7）,、呋喃妥因代謝物 1-氨基-2-內酰脲（縮寫AHD,，2827-56-7）和呋喃唑酮代謝物 3-氨基-2-噁唑烷基酮（縮寫AOZ,80-65-9）。

三,、應用范圍

本方法適用于動物源性食品包括豬肉,、牛肉、雞肉、豬肝和水產品（魚類,、蝦蟹類和貝類）中硝基呋喃類代謝物殘留檢測,。

四、參考標準

參考國家標準《GB/T 20752-2006 豬肉,、牛肉,、雞肉、豬肝和水產品中硝基呋喃類代謝物殘留量的測定 液相色譜-串聯(lián)質譜法》和農業(yè)部公告《農業(yè)部 1077 號公告-2-2008 水產品中硝基呋喃代謝物殘留量的測定》

五,、實驗材料

NuAnalytical Polyclean X-HLB 固相萃取柱 60mg/3mL,。六、實驗方法

1,、 樣品待測溶液制備

（1）樣品稱取脫脂

稱取待測樣品 2g（到 0.01g）,，置于 50mL 離心管中加入 10mL 甲醇-水混合物（2+1），振蕩混勻 10min,，4000r/min 離心 10min，吸取清液棄掉,、離心管中試樣備用,。

（2）水解衍生化

向上述離心管中加入 20mL0.2mol/L 鹽酸，振蕩混勻 10min,，后加入 0.4mL 0.05mol/L 2-硝基苯甲醛（0.075g  2-硝基苯甲醛溶于 10mL  二甲亞砜）,，渦旋混勻 1min，置于 37℃恒溫振蕩器水浴中避光反應 16h,。

將上述衍生液,，放置至室溫，加入 5mL0.1mol/L 磷酸氫二甲溶液,，用 1mol/L NaOH 調節(jié) pH 到約 7.4,，4000r/min 離心 10min，上清液（對脂肪含量多的試樣,，可加入 5mL 正己烷,，振蕩 2min，4000r/min 離心5min 吸取并棄掉正己烷）備 HLB 柱萃取凈化用,。

2,、活化

依次用 5mL 甲醇、10mL 水活化,。

3,、上樣和洗脫

取上述備用液控制流速小于 2 mL/min 過柱。待樣液全部通過后用 10mL 水淋洗上樣柱,， 棄去全部流出液并真空抽干,，zui后用 5 mL 乙酸乙酯洗脫柱子上的待測成分。

4、重新溶解

收集洗脫液,，于 40 ℃氮氣吹干,，準確加入 1.0 mL 乙腈/水（1/2，V/V）溶液溶解殘余物混勻,，0.22 μm 濾膜過濾,，供液相色譜測定。

5,、HPLC 條件

色譜柱：SuperLu C18 (250×4.6mm,，5μm)

檢測器：Waters 2487  紫外雙波長檢測器；檢測波長：275nm

流動相：A-乙腈    B- 0.01mmol/L 乙酸銨（0.77g 乙酸銨,，1000mL 水溶解,，甲酸調 pH

3.5  ）

洗脫方式：梯度洗脫，梯度條件如下：

柱溫：30℃     流速：1.0 mL/min             進樣量：20μL七,、實驗結果

1,、添加水平為 0.5mg/kg 豬肉基質中四種硝基呋喃代謝物衍生物的添加回收結果

表 1   添加水平為 0.5mg/kg 豬肉基質中四種硝基呋喃代謝物衍生物的添加回收結果

2、添加水平為 0.5mg/kg 豬肉基質中四種硝基呋喃代謝物衍生物的紫外檢測色譜圖

圖 1   添加水平為 0.5 mg/kg 豬肉中硝基呋喃代謝物衍生物檢測的液相色譜圖