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關(guān)鍵詞:全基因合成|實驗技術(shù)服務(wù)
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全基因合成|實驗技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達(dá)體系,。
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產(chǎn)品品牌:
測序?qū)嶒灹鞒蹋?br>DNA是十分龐大的生物分子,。病毒含有幾千到幾十萬個核苷酸,,原核生物的DNA分子平均為10E6個堿基對,真核生物的DNA分子可達(dá)l0E9個堿基對,。按每個基因平均為1000個堿基對進(jìn)行粗略的計算,,大腸桿菌約有3000-4000個基因,而人類細(xì)胞的基因數(shù)目可高達(dá)200萬個,。雖然其中某些基因,,特別是真核細(xì)胞內(nèi)的一些基因是多拷貝的,在基因組內(nèi)有多個甚多個重復(fù),,實際基因數(shù)要比上述推算的基因數(shù)要少得多,。盡管如此,原核細(xì)胞和真核細(xì)胞基因組內(nèi)的基因數(shù)目仍然是極為驚人的,。
人工合成
由于研究某些基因或者某種蛋白的生理作用,,例如生理活性等,因此,,需要通過人工實驗的方法合成一段全基因序列,。
有效方法
經(jīng)過基因工程學(xué)工作者艱苦細(xì)致的探索研究,人們現(xiàn)在已經(jīng)掌握了分離和制造目的基因的一些有效方法。一般來說,,目前獲取目的基因的方法主要有三種:反向轉(zhuǎn)錄法,、從細(xì)胞基因組直接分離法和人工化學(xué)合成法,這些方法都有一個前提,,就是已有文獻(xiàn)報道所研究的目的基因的蛋白序列或者基因的序列,。
1、反向轉(zhuǎn)錄法
這種方法主要用于分子量較大而又不知其序列的基因,,它以目的基因的mRNA為模板,,設(shè)計上下游引物,借助反轉(zhuǎn)錄酶合成堿基互補的DNA片段,,即cDNA,,再在DNA聚合酶的作用下合成雙鏈cDNA,亦即目的基因的雙鏈DNA,。
2,、基因組擴(kuò)增法
利用基因組抽提試劑盒,可以從細(xì)胞,、植物,、血液、動物組織中直接分離基因組,,設(shè)計特異擴(kuò)增的引物,,利用抽提的基因組為模版,直接PCR擴(kuò)增,,以獲取目的基因,。
3、人工合成
依照某一蛋白質(zhì)的氨基酸序列,,或基因序列,,設(shè)計全長引物,利用OVERLAP方法形成模版DNA,,再利用PCR擴(kuò)增的方法得到雙鏈DNA,,然后將PCR產(chǎn)物轉(zhuǎn)化克隆至克隆載體或者表達(dá)載體中?;瘜W(xué)合成全基因目前是準(zhǔn)確率zui高,,速度zui快的方法,同時可以依據(jù)密碼子在不同宿主細(xì)胞的偏愛性和不同的實驗需求,,設(shè)計基因序列,,提高表達(dá)水平。
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