關(guān)鍵詞:侵襲小室實驗|實驗技術(shù)服務(wù)
簡介：世界*品牌侵襲小室實驗|實驗技術(shù)服務(wù)原裝,，質(zhì)量保證,*,。
侵襲小室實驗|實驗技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系。
我們具備豐富的蛋白表達設(shè)計經(jīng)驗及實驗操作技巧,，承諾客戶不成功不收費,。我們所有的實驗數(shù)據(jù)真實可信，我們提供原始的表達菌株和克隆質(zhì)粒,，客戶可以依據(jù)我們的實驗報告重復我們的實驗結(jié)果,。
產(chǎn)品品牌：   
測序?qū)嶒灹鞒蹋?br>侵襲小室小室制備
① 包被基底膜：
用50mg/LMatrigel 1:8稀釋液包被Transwell小室底部膜的上室面，4℃風干,。如果需要在下室面鋪FN的話,，可將200ul槍頭的剪掉,吸取FN均勻涂抹在小室的下面。用膠原（collagen）的話,，一般配成0.5mg/ml,，直接用槍吸了涂在膜上。
② 水化基底膜：
吸出培養(yǎng)板中殘余液體,，每孔加入50ul含10g/LBSA的無血清培養(yǎng)液,，37℃，30min,。
另有tianjin_glioma戰(zhàn)友提供的方法：在上室的聚碳酸酯膜上加入稀釋后的Matrigel (3.9ug/ul) 60-80μl (注意體積不可太大,，以剛把聚碳酸酯膜浸濕為)，置37℃ 30min使Matrigel聚合成凝膠,。
有基質(zhì)膠的Transwell小室制備
Chemicon公司的ECM550系列說明書要求,，將小室放入培養(yǎng)板中,，在上室加入300μl預溫的無血清培養(yǎng)基,，室溫下靜置15－30min,，使基質(zhì)膠再水化。再吸去剩余培養(yǎng)液,。
制備細胞懸液
① 制備細胞懸液前可先讓細胞撤血清饑餓12－24h,，進一步去除血清的影響。但這一步并不是必須的,。
② 消化細胞,，終止消化后離心棄去培養(yǎng)液，用PBS洗1－2遍,，用含BSA的無血清培養(yǎng)基重懸,。調(diào)整細胞密度至1－10×105。
具體實驗時采用密度要自己摸索,，因為不同細胞,，其侵襲能力是不同的。個人經(jīng)驗,，細胞量過多,，穿過膜的細胞會過多過快，如果zui后用計數(shù)法統(tǒng)計結(jié)果的話將難以計數(shù),；而過少的話,，可能還沒到檢測的時間點，所有的細胞都已穿過,，因此zui少也要保證在收樣的時候,，上室內(nèi)還要有一定量的細胞存在。
個人認為,，對照組和處理盡量不要分開計數(shù),，因為細胞數(shù)目的差異會嚴重影響實驗結(jié)果。如果需要對細胞預處理而不得不分開計數(shù),，那么計數(shù)一定要多重復幾次,，力求準確，盡量保證對照組和處理組細胞密度一致,。
接種細胞
① 取細胞懸液100－200μl加入Transwell小室,，不同公司的、不同大小的Transwell小室對細胞懸液量有不同要求,，請參考說明書,。24孔板小室一般200μl。
② 24孔板下室一般加入500μl含F(xiàn)BS或趨化因子的培養(yǎng)基,，不同的培養(yǎng)板加的量有不同要求,，具體請參考說明書。這里要特別注意的是，下層培養(yǎng)液和小室間常會有氣泡產(chǎn)生,，一旦產(chǎn)生氣泡,，下層培養(yǎng)液的趨化作用就減弱甚至消失了，在種板的時候要特別留心,，一旦出現(xiàn)氣泡,，要將小室提起，去除氣泡,，再將小室放進培養(yǎng)板,。
③ 培養(yǎng)細胞：常規(guī)培養(yǎng)12－48h（主要依癌細胞侵襲能力而定）。時間點的選擇除了要考慮到細胞細胞侵襲力外,，處理因素對細胞數(shù)目的影響也不可忽視,。
通過給細胞染色，可在鏡下計數(shù)細胞
① 用棉簽擦去基質(zhì)膠和上室內(nèi)的細胞
② 染色：常用的染色方法有結(jié)晶紫染色,、臺肦藍染色,、Giemsa染色、蘇木精染色,、伊紅染色等,。
優(yōu)勢：
(1). 不需要固定細胞，直接染色即可,。
(2). 配制簡單方便,。
(3). 染色后可以用33%醋酸脫色，將結(jié)晶紫*洗脫下來,，洗脫液可在酶標儀上570nm 測其OD值,，間接反映細胞數(shù)。