關(guān)鍵詞:免疫共沉淀|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)
簡介：世界*品牌免疫共沉淀|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)原裝，質(zhì)量保證,*,。
免疫共沉淀|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達(dá)體系。
我們具備豐富的蛋白表達(dá)設(shè)計經(jīng)驗(yàn)及實(shí)驗(yàn)操作技巧,，承諾客戶不成功不收費(fèi),。我們所有的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)真實(shí)可信，我們提供原始的表達(dá)菌株和克隆質(zhì)粒,，客戶可以依據(jù)我們的實(shí)驗(yàn)報告重復(fù)我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,。
產(chǎn)品品牌：   
測序?qū)嶒?yàn)流程：
各種成分在工作液中的終濃度：
* Tris-HCl: 50 mM, pH 7.4
* NP-40: 1%
* 去氧膽酸鈉：0.25%
* NaCl: 150 mM
* EDTA: 1 mM
* PMSF: 1 mM
* 抑蛋白酶肽，亮抑酶肽,胃蛋白酶抑制劑: 各1 μg/ml
* Na3VO4: 1 mM
* NaF: 1 mM
實(shí)驗(yàn)流程為：
1．用磷酸鹽緩沖液洗30塊10 cm培養(yǎng)板上的適宜細(xì)胞,。刮去每塊板上的細(xì)胞到1 ml冰冷的EBC裂解緩沖液中,。
2．將每毫升細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到微量離心管中，在微量離心機(jī)上4℃以zui大速度離心15 min,。
3．收集上清（約30 ml）并加入30μg的適當(dāng)抗體,，4℃搖動免疫沉淀物1 h。
4．加入0.9 ml的蛋白質(zhì)A-Sepharose 懸液,，4℃搖動免疫沉淀物30 min,。
5．用含900 mmol/L NaCl的NETN洗蛋白A-Sepharose混合物,，再重復(fù)洗5次。zui后,，用NETN洗一次,。
6．吸出混合物的液體部分。加入800μl的1×SDS膠加樣緩沖液到球珠中,，煮沸4 min,。
7．將樣品加入到大孔的不連續(xù)SDS-PAGE梯度膠中，在10 mA的恒定電流下電泳,。
8．通過考馬斯藍(lán)染色觀察蛋白質(zhì)泳帶,。
9．從膠上切下目標(biāo)帶，將其放到微量離心管中,，用1ml 50%乙腈洗兩次,，每次3 min。
10． 用胰蛋白酶消化膠中的蛋白質(zhì),，再將肽電洗脫,。
11． 通過窄孔液相色譜分離肽。將收集的肽在ABI 477A或494A機(jī)器上進(jìn)行自動Edman降解測序,。
在免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)中要保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的真實(shí)性,，應(yīng)注意以下幾點(diǎn)：
(1) 確保共沉淀的蛋白是由所加入的抗體沉淀得到的，而并非外源非特異蛋白,，單克隆抗體的使用有助于避免污染的發(fā)生,；
(2) 要確保抗體的特異性,，即在不表達(dá)抗原的細(xì)胞溶解物中添加抗體后不會引起共沉淀,；
(3) 確定蛋白間的相互作用是發(fā)生在細(xì)胞中，而不是由于細(xì)胞的溶解才發(fā)生的,，這需要進(jìn)行蛋白質(zhì)的定位來確定,。