關鍵詞:流式細胞術檢測服務|實驗技術服務
簡介：世界*品牌流式細胞術檢測服務|實驗技術服務原裝,，質量保證,*,。
流式細胞術檢測服務|實驗技術服務——pCzn1質粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系,。
我們具備豐富的蛋白表達設計經驗及實驗操作技巧,，承諾客戶不成功不收費,。我們所有的實驗數據真實可信,，我們提供原始的表達菌株和克隆質粒，客戶可以依據我們的實驗報告重復我們的實驗結果,。
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測序實驗流程：
PI 染色操作步驟
1,、將單細胞懸液加入2ml圓底離心管中,，離心，1500rpm , 5min,，棄上清液,。
2,、加入PBS 1ml離心洗滌1次，棄上清,。
3,、加入2ml預冷的70%酒精，4℃固定30min,，或是-20℃固定,。
4、離心,，棄上清液。
5,、用1×PBS 1ml洗滌1次,，離心。
6,、加入RNase A (工作濃度20ug/ml)于500ul 1×PBS中,，37℃孵育30min，離心,。
7,、用1×PBS 1ml洗滌1次，離心,。
8,、加入PI(工作濃度50ug/ml) 于500ul 1×PBS中，室溫避光孵育30min,。
9,、混勻，過300目篩網,，置流式管中,， 4℃冰箱保存，待測,。
細胞表面直接免疫熒光染色操作步驟
1,、將單細胞懸液加入2ml圓底離心管中，離心,，1500rpm,，5min，棄上清液,。
2,、以冷PBA 1ml，離心洗滌,，棄上清液,。
3,、加入用PBA稀釋的熒光素標記的抗體200ul。用微量移液器輕輕吹打混勻,，4℃或置冰上孵育30min-1h,。
4、離心棄上清液,。
5,、加入冷PBS1ml,離心洗滌2次，以除去未結合的多余抗體成分,。
6,、向細胞中加入冷PBS 500ul,吹打混勻，置流式管中,，4℃避光保存,，待測。
胞內直接免疫熒光染色操作步驟
1,、將單細胞懸液加入2ml圓底離心管中,，離心，1500rpm , 5min,，棄上清液,。
2、用1×PBS1ml洗滌1次,，離心,。
3、4%PFA 1ml,，4℃固定30min,。
4、用1×PBS1ml洗滌1次,，離心,。
5、0,、1% Triton-100 1ml, 室溫10min,。
6、用1×PBS1ml洗滌1次,，離心,。
7、加入用PBA稀釋的熒光素標記的抗體200ul,，用微量移液器輕輕吹打混勻,，4℃或置冰上孵育30min-1h。
8,、離心棄上清液,。
9,、加入冷PBS1ml,離心洗滌2次，以除去未結合的多余抗體成分,。
10,、向細胞中加入冷PBS500ul,吹打混勻，置流式管中,，4℃避光保存,，待測。
備注：                                                
1,、RNase A：貯液濃度：1mg/ml,；
工作液配制：加1 mg/ml貯液 10ul于500ul 1×PBS中，使終濃度為 20ug/ml,。
2,、PI：貯液濃度：2、5mg/ml,；       
工作液配制：加2、5 mg/ml貯液 10ul于500ul 1×PBS中,，使終濃度為 50ug/ml,。
3、PBA：即PBS加1-2% 牛血清白蛋白,，加0,、1%疊氮鈉。
4,、檢測樣品細胞濃度1x106 /ml,。
流式細胞術測細胞表面抗原步驟
1. 定量細胞濃度
2. 分為2組，一組為實驗組,，另一組為抗體對照組
3. 兩組都先加入非特異性的IgG,，封閉可能的Fc受體
4. 按照抗體生產廠家的推薦濃度加入抗體，對照組加入同樣熒光標記的非特異性同型抗體,。
5. 4°孵育半小時
6. 用含0.5% BSA的PBS洗2遍
7. 上機后先用抗體對照組設置陰性Gate,。
8. 檢測樣本。