關(guān)鍵詞:核酸提取與純化技術(shù)服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)
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核酸提取與純化技術(shù)服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達(dá)體系,。
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產(chǎn)品品牌：   http://www.,。。ｃｏｍ/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html    
測(cè)序?qū)嶒?yàn)流程：
1.核酸的提取
核酸都溶于水,，而不溶于有機(jī)溶劑,，利用此性質(zhì)進(jìn)行提取。在細(xì)胞內(nèi)DNA與蛋白質(zhì)結(jié)合成脫氧核糖核蛋白（DNP）,，RNA與蛋白質(zhì)結(jié)合成核糖核蛋白（RNP）,，在不同濃度的鹽溶液中它們的溶解度差別很大，DNP在純水或1 mol/LNaCl溶液中溶解度較大,，但在0.14mol/LNaCl溶液中溶解度很低,，相反，RNP易溶解,。因此,，用0.14mol/LNaCl溶液可簡(jiǎn)單地初步分開DNP和RNP。
在分離核酸中zui困難的是將核酸與緊密結(jié)合的蛋白質(zhì)分開,，而且還要避免核酸的降解,。常用的解離劑是陰離子去垢劑，如脫氧膽酸鈉,，十二烷基硫酸鈉（SDS）,，４－氨基水楊酸鈉和萘－1，5－二磺酸鈉等，它們具有溶解病毒,、細(xì)菌的作用,，可使核酸從蛋白質(zhì)上游離出來，還具有抑制核糖核酸酶的作用,。另外除去核酸中的蛋白質(zhì)的一個(gè)有效辦法是用酚－氯仿混合液,，它們可使蛋白質(zhì)變性，并對(duì)核糖核酸酶有抑制作用,，另外氯仿比重大可使有機(jī)相和水相*分開,，減少殘留在水相中的酚。在用酚－氯仿抽提核酸提取液時(shí),，還須要?jiǎng)×艺駬u,，為防止起泡和促使水相與有機(jī)相的分離，在酚－氯仿抽提液中再加上一定量的異戊醇,。
2. 核酸的純化
核酸的純化zui關(guān)鍵步驟是去除蛋白質(zhì)，通常只要用酚／氯仿,、氯仿抽提核酸的水溶液即可,。每當(dāng)需要把DNA克隆操作的某一步所用的酶滅活或去除以便進(jìn)行下一步時(shí)，可進(jìn)行這種抽提,。然而,，如果從細(xì)胞裂解液等復(fù)雜的分子混合物中純化核酸，則要先用某些蛋白水解酶消化大部分蛋白質(zhì)后,，再用有機(jī)溶劑抽提,。這些廣譜的蛋白酶包括鏈霉蛋白酶及蛋白酶Ｋ等，它們對(duì)多數(shù)天然蛋白質(zhì)均有活性,。
用酚／氯仿抽提：這兩種有機(jī)溶劑合用,，比單獨(dú)用酚抽提除蛋白效果更佳。繼而用氯仿抽提則可除去核酸制品中的痕量酚,。具體步驟如下：
①核酸樣品置有蓋小離心管中,，加入等體積的酚／氯仿；②旋渦混勻管內(nèi)容物,，使呈乳狀,；③12000ｇ室溫離心15ｓ；④水相移入另一離心管,，棄去兩相界面和有機(jī)相,；⑤重復(fù)步驟①～④，直至兩相界面上無(wú)蛋白質(zhì)為止,；⑥加入等體積的氯仿并重復(fù)②～④步操作,；⑦按下述核酸濃縮法沉淀回收核酸。
3.核酸的濃縮
應(yīng)用zui廣的核酸濃縮法是乙醇沉淀法。在中等濃度單價(jià)陽(yáng)離子存在下,，加入一定量的乙醇后,，所形成的核酸沉淀可經(jīng)離心而回收。甚至對(duì)低至ｐｇ（皮克）量的DNA或RNA,，也可定量回收,。回收的核酸可按所需濃度,，再溶于適當(dāng)?shù)木彌_液中,。具體操作時(shí)，可向含樣品的小離心管中加入單價(jià)陽(yáng)離子鹽貯存液,。單價(jià)陽(yáng)離子鹽的選擇,，主要基于下述考慮：用醋酸銨可減少dNTP的共沉淀，但在以后要作核酸的磷酸化時(shí)應(yīng)避免用醋酸銨,，因銨離子是多核苷酸激酶的強(qiáng)烈抑制劑,。當(dāng)用較高濃度的乙醇沉淀RNA時(shí)，常用LiCl,，因LiCl在乙醇中溶解度很高,，不隨核酸共沉淀。含有SDS的核酸樣品,，應(yīng)使用NaCl,，這時(shí)該去垢劑在70％乙醇中仍保持可溶。
DNA和RNA的沉淀,，大多使用醋酸鈉（pＨ5.2）,。
產(chǎn)品組成:
集液管
核酸純化柱的集液管由醫(yī)療級(jí)的聚丙烯制成，容量為2ml和50ml,。
Column
核酸純化柱的column由醫(yī)療級(jí)的聚丙烯制成,，底部為網(wǎng)狀或帶接口，容量約為1ml或25ml,。
墊片
核酸純化柱的墊片為特殊纖維材料,，耐受酸堿和大部分的有機(jī)溶劑，對(duì)大部分的生物分子不會(huì)產(chǎn)生吸附,。
濾膜
經(jīng)過特別優(yōu)化的進(jìn)口原料的硅膠膜或者玻璃纖維膜,，zui大程度的吸附核酸分子。
服務(wù)說明
?細(xì)菌,、細(xì)胞樣品需新鮮培養(yǎng),；動(dòng)物組織、植物組織等樣品取樣后需液氮或-80℃速凍,；
?用于提取基因組DNA的血液樣品在4℃下可保存一周,，-20℃下可保存1個(gè)月,；
產(chǎn)品用途：
1. 適用于動(dòng)物組織DNA/RNA提取：大腦,、心臟,、肺、胃,、肝臟,、胸腺、腎臟,、腸,、淋巴結(jié)、肌肉,、骨骼等,；
2．適用于植物組織DNA/RNA提取：葉子,、花,、根、種子等,；
3．適用于真菌,、細(xì)菌等樣本DNA/RNA提取,；
4．適用于法醫(yī)樣本DNA/RNA提取：煙頭,，糞便,，口腔拭子，尿液,，毛發(fā),，血漬，精液等,；
5．適用于體液DNA/RNA提?。貉濉⒀獫{,、尿液,、腦脊液、唾液,、黏膜分泌液等,；
6．適用于培養(yǎng)細(xì)胞DNA/RNA提取：HeLa,、NIH/3T3,、cos-7細(xì)胞等,；
7．適用于全血、白細(xì)胞層等樣本DNA/RNA提??；