關(guān)鍵詞:單克隆抗體制備|實驗技術(shù)服務(wù)
簡介：世界*品牌單克隆抗體制備|實驗技術(shù)服務(wù)原裝,，質(zhì)量保證,*,。
單克隆抗體制備|實驗技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達(dá)體系,。
我們具備豐富的蛋白表達(dá)設(shè)計經(jīng)驗及實驗操作技巧,，承諾客戶不成功不收費,。在獲得重組蛋白產(chǎn)品的同時,，我們也會提供相應(yīng)的原始數(shù)據(jù)和原始圖片,不需要再額外花費精力重復(fù)實驗,。另一方面,，我們所有的實驗數(shù)據(jù)真實可信，我們提供原始的表達(dá)菌株和克隆質(zhì)粒,，客戶可以依據(jù)我們的實驗報告重復(fù)我們的實驗結(jié)果,。
產(chǎn)品品牌：   http://www.。,。ｃｏｍ/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html    
測序?qū)嶒灹鞒蹋?br>1,、免疫動物 免疫動物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠產(chǎn)生致敏B淋巴細(xì)胞的 過程,。 一般選用6-8周齡雌性Balb/c小鼠,，按照預(yù)先制定的免疫方案進(jìn)行免疫注射。 抗原通過血液循環(huán)或淋巴循環(huán)進(jìn)入外周免疫器官,，刺激相應(yīng)B淋巴細(xì)胞克隆,，使其活化,、增殖，并分化成為致敏B淋巴細(xì)胞,。
2,、細(xì)胞融合 采用眼球摘除放血法處死小鼠，無菌操作取出脾臟,，在平皿內(nèi)擠壓研磨,，制備脾細(xì)胞懸液。 將準(zhǔn)備好的同系骨髓瘤細(xì)胞與小鼠脾細(xì)胞按一定比例混合,，并加入促融合劑聚乙二醇,。在聚乙二醇作用下，各種淋巴細(xì)胞可與骨髓瘤細(xì)胞發(fā)生融合,，形成雜交瘤細(xì)胞,。
3、選擇性培養(yǎng) 選擇性培養(yǎng)的目的是篩選融合的雜交瘤細(xì)胞,，一般采用HAT選擇性培養(yǎng)基,。在HAT培養(yǎng)基中，未融合的骨髓瘤細(xì)胞因缺乏次黃嘌呤-鳥嘌呤-磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶,，不能利用補救途徑合成DNA而死亡,。 未融合的淋巴細(xì)胞雖具有次黃嘌呤-鳥嘌呤-磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶，但其本身不能在體外長期存活也逐漸死亡,。 只有融合的雜交瘤細(xì)胞由于從脾細(xì)胞獲得了次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶,，并具有骨髓瘤細(xì)胞能無限增殖的特性，因此能在HAT培養(yǎng)基中存活和增殖,。
4,、雜交瘤陽性克隆的篩選與克隆化 在HAT培養(yǎng)基中生長的雜交瘤細(xì)胞，只有少數(shù)是分泌預(yù)定特異性單克隆抗體的細(xì)胞,，因此,，必須進(jìn)行篩選和克隆化。通常采用有限稀釋法進(jìn)行雜交瘤細(xì)胞的克隆化培養(yǎng),。采用靈敏,、快速、特異的免疫學(xué)方法,，篩選出能產(chǎn)生所需單克隆抗體的陽性雜交瘤細(xì)胞,，并進(jìn)行克隆擴增。經(jīng)過全面鑒定其所分泌單克隆抗體的免疫球蛋白類型,、亞類,、特異性、親和力,、識別抗原的表位及其分子量后,，及時進(jìn)行凍存,。
5、單克隆抗體的大量制備 單克隆抗體的大量制備重要采用動物體內(nèi)誘生法和體外培養(yǎng)法,。
(1)體內(nèi)誘生法 取Balb/c小鼠,，首先腹腔注射0.5ml液體石臘或降植烷進(jìn)行預(yù)處理。1-2周后,，腹腔內(nèi)接種雜交瘤細(xì)胞,。雜交瘤細(xì)胞在小鼠腹腔內(nèi)增殖，并產(chǎn)生和分泌單克隆抗體,。約1-2周,，可見小鼠腹部膨大。用注射器抽取腹水,，即可獲得大量單克隆抗體,。
(2)體外培養(yǎng)法 將雜交瘤細(xì)胞置于培養(yǎng)瓶中進(jìn)行培養(yǎng)。在培養(yǎng)過程中,，雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生并分泌單克隆抗體,，收集培養(yǎng)上清液，離心去除細(xì)胞及其碎片,，即可獲得所需要的單克隆抗體,。但這種方法產(chǎn)生的抗體量有限。近年來,，各種新型培養(yǎng)技術(shù)和裝置不斷出現(xiàn),，大大提高了抗體的生產(chǎn)量。
雜交瘤細(xì)胞融合后,，要進(jìn)行篩選后才能使用,。雜交瘤細(xì)胞分為兩次：一,、篩選出雜交瘤細(xì)胞;二,、在初選的雜交瘤細(xì)胞中篩選出能產(chǎn)生特異性抗體的雜家瘤細(xì)胞，這兩次篩選的方法和原理各不相同,。