關(guān)鍵詞:MTT檢測技術(shù)服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)
簡介：世界*品牌MTT檢測技術(shù)服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)原裝,，質(zhì)量保證,*,。
MTT檢測技術(shù)服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系。
我們具備豐富的蛋白表達設(shè)計經(jīng)驗及實驗操作技巧,，承諾客戶不成功不收費,。在獲得重組蛋白產(chǎn)品的同時,，我們也會提供相應(yīng)的原始數(shù)據(jù)和原始圖片,不需要再額外花費精力重復實驗。另一方面,，我們所有的實驗數(shù)據(jù)真實可信,，我們提供原始的表達菌株和克隆質(zhì)粒，客戶可以依據(jù)我們的實驗報告重復我們的實驗結(jié)果,。
產(chǎn)品品牌：   http://www.,。。ｃｏｍ/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html    
測序?qū)嶒灹鞒蹋?br>MTT為黃色化合物,，是一種接受氫離子的染料,，在活細胞中作用于線粒體的呼吸鏈，MTT在琥珀酸脫氫酶和細胞色素C的作用下生成藍色的formazan結(jié)晶,，formazan結(jié)晶的生成量與活細胞數(shù)目成正比，生成的formazan結(jié)晶可溶解在DMSO中,，利用酶標儀測定570 nm處的光密度OD值,，可以反映出活細胞數(shù)目和細胞活力。死細胞中由于沒有琥珀酸脫氫酶,，因此不能還原MTT生成formazan結(jié)晶,。
優(yōu)點：經(jīng)濟、靈敏度高,，可用于大規(guī)模的抗腫瘤藥物篩選,、細胞毒性試驗以及腫瘤放射敏感性測定等。
缺點：由于MTT經(jīng)還原所產(chǎn)生的formazan結(jié)晶產(chǎn)物不溶于水,，需有機溶劑溶解后才能檢測,，這不僅使工作量增加，也會對實驗結(jié)果的準確性產(chǎn)生影響,，而且有機溶劑對實驗人員也有損害,。
①將對數(shù)生長期的細胞濃度調(diào)整為1~10×104細胞/ml，按103~104個細胞接種于96孔板,，每孔100 μl,；
②培養(yǎng)細胞24小時后，對其進行不同處理,，每個處理設(shè)三個平行對照,；
③（MTT法）適當培養(yǎng)時間后，取出細胞,，倒掉培養(yǎng)液,，每孔加入5 mg/ml新鮮配制的MTT溶液，溫育4小時,，再次倒掉上清液,，每孔加入200 ml DMSO,，搖勻后，酶標儀檢測吸光值,。
③（臺盼藍拒染法）適當培養(yǎng)時間后,，收集細胞，經(jīng)臺盼藍染色,，在倒置顯微鏡下計數(shù)藍染及不染色細胞,，計算細胞存活率。
操作步驟：
1,、無菌條件下取新生一天的SD大鼠DRG,。
2、鏡下去除神經(jīng)根和外膜,，接種于預(yù)先涂有L-多聚賴氨酸的96孔培養(yǎng)板中,，每孔1個DRG。
3,、待DRG貼壁后加入100μl無血清L15基礎(chǔ)培養(yǎng)基,，實驗組加入純化的表達蛋白（分別以不同的蛋白濃度），陰性對照加入等體積的溶解表達蛋白的溶劑,。
4,、37℃ 5%CO2培養(yǎng)，每天在Olympus倒置顯微鏡下觀察細胞的生長情況,，并進行測量,，其數(shù)據(jù)作統(tǒng)計分析。
注意事項
1,、選擇適當?shù)眉毎臃N濃度,。
2、避免血清干擾：一般選小于10%的胎牛血清的培養(yǎng)液進行試驗,。在呈色后盡量吸盡孔內(nèi)殘余培養(yǎng)液,。
3、設(shè)空白對照：與試驗平行不加細胞只加培養(yǎng)液的空白對照,。其他試驗步驟保持一致,，zui后比色以空白調(diào)零。
MTT實驗吸光度zui后要在0-0.7之間,，超出這個范圍就不是直線關(guān)系,IC50是半抑制率,，意思是抑制率50％的時候藥物的濃度。把藥品稀釋成不同的濃度,，然后計算各自的抑制率,，以藥品的濃度為橫坐標，抑制率為縱坐標作圖,，然后得到50％抑制率時候的藥品濃度,，就是IC50,。要點：藥品2倍稀釋，多做梯度.