關(guān)鍵詞:IP和Co-IP技術(shù)服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)
簡介：世界*品牌IP和Co-IP技術(shù)服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)原裝,，質(zhì)量保證,*,。
IP和Co-IP技術(shù)服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系。
我們具備豐富的蛋白表達設(shè)計經(jīng)驗及實驗操作技巧,，承諾客戶不成功不收費,。在獲得重組蛋白產(chǎn)品的同時，我們也會提供相應(yīng)的原始數(shù)據(jù)和原始圖片,不需要再額外花費精力重復(fù)實驗,。另一方面,，我們所有的實驗數(shù)據(jù)真實可信，我們提供原始的表達菌株和克隆質(zhì)粒,，客戶可以依據(jù)我們的實驗報告重復(fù)我們的實驗結(jié)果。
產(chǎn)品品牌：   http://www.,。,。ｃｏｍ/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html    
測序?qū)嶒灹鞒蹋?br>免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）可以：（1）測定兩種目標蛋白質(zhì)是否在體內(nèi)結(jié)合,；（2）確定一種特定蛋白質(zhì)的新的作用搭檔；（3）分離得到天然狀態(tài)的相互作用蛋白復(fù)合物,。
免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎(chǔ)的用于研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法,。是確定兩種蛋白質(zhì)在完整細胞內(nèi)生理性相互作用的有效方法。
其原理是：當細胞在非變性條件下被裂解時,，完整細胞內(nèi)存在的許多蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)間的相互作用被保留了下來,。如果用蛋白質(zhì)X的抗體免疫沉淀X，那么與X在體內(nèi)結(jié)合的蛋白質(zhì)Y也能沉淀下來,。目前多用精制的proreinA預(yù)先結(jié)合固化在argarose的beads上,，使之與含有抗原的溶液及抗體反應(yīng)后，beads上的proreinA就能吸附抗原達到精制的目的,。這種方法常用于測定兩種目標蛋白質(zhì)是否在體內(nèi)結(jié)合,；也可用于確定一種特定蛋白質(zhì)的新的作用搭檔。
免疫共沉淀是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎(chǔ)的用于研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法,。是確定兩種蛋白質(zhì)在完整細胞內(nèi)生理性相互作用的有效方法,。其原理是：當細胞在非變性條件下被裂解時，完整細胞內(nèi)存在的許多蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)間的相互作用被保留了下來,。如果用蛋白質(zhì)X的抗體免疫沉淀X,，那么與X在體內(nèi)結(jié)合的蛋白質(zhì)Y也能沉淀下來。這種方法常用于測定兩種目標蛋白質(zhì)是否在體內(nèi)結(jié)合,；也可用于確定一種特定蛋白質(zhì)的新的作用搭檔,。
具體操作：
收獲細胞，加入適量細胞裂解緩沖液（含蛋白酶抑制劑）,，冰上裂解30min, 細胞裂解液于4°c,， zui大轉(zhuǎn)速離心30 min后取上清；
取少量裂解液以備western blot分析,，剩余裂解液加1μg相應(yīng)的抗體加入到細胞裂解液,，4°c緩慢搖晃孵育；
取10μl protein a 瓊脂糖珠,，用適量裂解緩沖液洗3 次,，每次3,000 rpm離心3 min；
將預(yù)處理過的10μl protein a 瓊脂糖珠加入到和抗體孵育的細胞裂解液中4°c緩慢搖晃孵育2-4h,，使抗體與protein a瓊脂糖珠偶連,；
免疫沉淀反應(yīng)后，在4°c 以3,000 rpm 速度離心3 min,，將瓊脂糖珠離心至管底,；將上清小心吸去，瓊脂糖珠用1ml裂解緩沖液洗3－4次,；zui后加入15μl的2×sds 上樣緩沖液,，沸水煮5分鐘,；
sds-page, western blotting或質(zhì)譜儀分析。
注意事項
(1)細胞裂解采用溫和的裂解條件,，不能破壞細胞內(nèi)存在的所有蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)相互作用,，多采用非離子變性劑(NP40或Triton X-100)。每種細胞的裂解條件是不一樣的,，通過經(jīng)驗確定,。不能用高濃度的變性劑(0.2％SDS)，細胞裂解液中要加各種酶抑制劑,，如商品化的 cocktailer,。
(2)使用明確的抗體，可以將幾種抗體共同使用
(3)使用對照抗體：
單克隆抗體：正常小鼠的IgG或另一類單抗
兔多克隆抗體：正常兔IgG
在免疫共沉淀實驗中要保證實驗結(jié)果的真實性,，應(yīng)注意以下幾點：
(1) 確保共沉淀的蛋白是由所加入的抗體沉淀得到的,，而并非外源非特異蛋白，單克隆抗體的使用有助于避免污染的發(fā)生,；
(2) 要確?？贵w的特異性，即在不表達抗原的細胞溶解物中添加抗體后不會引起共沉淀,；
(3) 確定蛋白間的相互作用是發(fā)生在細胞中,，而不是由于細胞的溶解才發(fā)生的，這需要進行蛋白質(zhì)的定位來確定,。