樣本收集:依據(jù)實驗需求,,采集適量人血清、血漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清等樣本,。血清樣本需在血液自然凝固后離心獲?。谎獫{樣本則需使用抗凝劑處理血液后離心得到,;細(xì)胞培養(yǎng)上清按細(xì)胞培養(yǎng)規(guī)范收集并離心去除細(xì)胞碎片等雜質(zhì),。收集后的樣本應(yīng)妥善保存,避免反復(fù)凍融,。
試劑盒準(zhǔn)備:從冰箱取出試劑盒,,室溫平衡 30 分鐘,使試劑盒內(nèi)各試劑溫度與室溫一致,,減少溫度差異對實驗結(jié)果的影響,。同時,準(zhǔn)備好實驗所需的移液器,、吸頭,、酶標(biāo)儀等器材,并確保其性能良好,。
加樣:將標(biāo)準(zhǔn)品,、待測樣本及空白對照按規(guī)定體積準(zhǔn)確加入微孔板相應(yīng)孔中,輕輕振蕩混勻,,確保樣本與包被抗體充分接觸,,然后在設(shè)定溫度下孵育一定時間。
洗板:孵育結(jié)束后,,棄去孔內(nèi)液體,,用洗滌液充分洗滌微孔板 3 - 5 次,,以去除未結(jié)合的物質(zhì),,減少非特異性信號干擾,。每次洗滌后需拍干微孔板底部殘留液體。
加酶標(biāo)抗體:向各孔加入適量酶標(biāo)抗體,,振蕩混勻后再次孵育,。
顯色與終止:加入底物顯色液,避光孵育,,待顏色變化至合適程度時,,加入終止液終止反應(yīng),使反應(yīng)停止在最佳檢測狀態(tài),。
結(jié)果測定:立即使用酶標(biāo)儀在規(guī)定波長下測定各孔 OD 值,,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出樣本中雙花扁豆凝集素的含量。
高靈敏度:能夠檢測到極低濃度的雙花扁豆凝集素,,滿足對微量樣本或低表達(dá)水平的檢測需求,。
良好的特異性:試劑盒中的抗體對雙花扁豆凝集素具有高度特異性,與其他類似物質(zhì)交叉反應(yīng)極小,,保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性,。
重復(fù)性佳:同一批樣本多次檢測結(jié)果穩(wěn)定,變異系數(shù)小,,實驗結(jié)果可靠,,為科研及臨床診斷提供可重復(fù)性數(shù)據(jù)支持。