樣本收集:依據(jù)實驗需求,,采集適量人血清,、血漿或細胞培養(yǎng)上清等樣本。血清樣本需在血液自然凝固后離心獲??;血漿樣本則需使用抗凝劑處理血液后離心得到,;細胞培養(yǎng)上清按細胞培養(yǎng)規(guī)范收集并離心去除細胞碎片等雜質(zhì)。收集后的樣本應妥善保存,,避免反復凍融,。
試劑盒準備:從冰箱取出試劑盒,室溫平衡 30 分鐘,,使試劑盒內(nèi)各試劑溫度與室溫一致,,減少溫度差異對實驗結(jié)果的影響。同時,,準備好實驗所需的移液器,、吸頭、酶標儀等器材,,并確保其性能良好。
加樣:將標準品,、待測樣本及空白對照按規(guī)定體積準確加入微孔板相應孔中,,輕輕振蕩混勻,確保樣本與包被抗體充分接觸,,然后在設定溫度下孵育一定時間,。
洗板:孵育結(jié)束后,棄去孔內(nèi)液體,,用洗滌液充分洗滌微孔板 3 - 5 次,,以去除未結(jié)合的物質(zhì),減少非特異性信號干擾,。每次洗滌后需拍干微孔板底部殘留液體,。
加酶標抗體:向各孔加入適量酶標抗體,振蕩混勻后再次孵育,。
顯色與終止:加入底物顯色液,,避光孵育,待顏色變化至合適程度時,,加入終止液終止反應,,使反應停止在最佳檢測狀態(tài)。
結(jié)果測定:立即使用酶標儀在規(guī)定波長下測定各孔 OD 值,,根據(jù)標準曲線計算出樣本中雙花扁豆凝集素的含量,。
高靈敏度:能夠檢測到極低濃度的雙花扁豆凝集素,滿足對微量樣本或低表達水平的檢測需求,。
良好的特異性:試劑盒中的抗體對雙花扁豆凝集素具有高度特異性,,與其他類似物質(zhì)交叉反應極小,保證檢測結(jié)果的準確性,。
重復性佳:同一批樣本多次檢測結(jié)果穩(wěn)定,,變異系數(shù)小,,實驗結(jié)果可靠,為科研及臨床診斷提供可重復性數(shù)據(jù)支持,。