高靈敏度:能夠敏銳捕捉到極微量的人絲氨/酸蛋白酶,,檢測下限低
特異性強(qiáng):試劑盒內(nèi)的抗體經(jīng)過層層篩選與優(yōu)化,,對人絲氨/酸蛋白酶特異性ji高,幾乎不會與其他蛋白酶及干擾物質(zhì)發(fā)生交叉反應(yīng),。這有效避免了假陽性結(jié)果,,極大地保障了檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性與可靠性。
重復(fù)性佳:憑借嚴(yán)格的生產(chǎn)工藝與完善的質(zhì)量控制體系,,該試劑盒無論是批內(nèi)還是批間的重復(fù)性都十分出色,。多次重復(fù)檢測同一批次樣本,結(jié)果的變異系數(shù)(CV)被嚴(yán)格控制在極小范圍,,實(shí)驗(yàn)人員可獲取穩(wěn)定且可重復(fù)的數(shù)據(jù),,為科學(xué)研究的可重復(fù)性提供有力支持。
操作便捷:試劑盒配備了齊全的試劑以及詳盡的操作說明書,,實(shí)驗(yàn)步驟清晰易懂,。哪怕是新手實(shí)驗(yàn)人員,也能快速上手操作,。整個檢測流程無需復(fù)雜的儀器設(shè)備和高深的專業(yè)技能,,顯著節(jié)省了實(shí)驗(yàn)時間與人力成本。
檢測范圍寬:其檢測范圍覆蓋了人絲氨/酸蛋白酶在正常生理以及多種病理狀態(tài)下常見的濃度區(qū)間,。既能精準(zhǔn)檢測正常情況下低水平的絲氨/酸蛋白酶表達(dá),,也能準(zhǔn)確測定在疾病或?qū)嶒?yàn)干預(yù)后可能出現(xiàn)的高水平絲氨/酸蛋白酶變化,適用于各類相關(guān)研究場景,。
樣本準(zhǔn)備:依據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖占濉⒀獫{,、組織勻漿,、細(xì)胞培養(yǎng)上清等樣本。確保樣本采集過程規(guī)范,,避免污染,、溶血等情況干擾檢測結(jié)果。若樣本采集后需保存,,應(yīng)置于 - 20℃或 - 80℃冰箱,,防止反復(fù)凍融。
試劑準(zhǔn)備:從冰箱取出試劑盒,,使其恢復(fù)至室溫,。按照說明書依次準(zhǔn)備好標(biāo)準(zhǔn)品、酶標(biāo)抗體,、底物,、洗滌液等試劑,。標(biāo)準(zhǔn)品需進(jìn)行系列倍比稀釋,用于繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,。
加樣:將稀釋好的標(biāo)準(zhǔn)品和處理后的樣本加入預(yù)包被有抗人絲氨/酸蛋白酶抗體的微孔板中,,同時設(shè)置空白對照孔。輕輕振蕩使液體混合均勻,,隨后將微孔板放入 37℃恒溫孵育箱孵育一段時間,,促使樣本中的絲氨/酸蛋白酶與包被抗體充分結(jié)合。
洗滌:孵育結(jié)束后,,倒掉孔內(nèi)液體,,用洗滌液充分洗滌微孔板 5 次,以清除未結(jié)合的物質(zhì),,降低非特異性背景信號,。每次洗滌后要將微孔板拍干,確保洗滌效果,。
加酶標(biāo)抗體:向每孔加入適量酶標(biāo)抗體,再次輕輕振蕩混勻,,放入 37℃恒溫孵育箱孵育一段時間,,讓酶標(biāo)抗體與已結(jié)合在包被抗體上的絲氨/酸蛋白酶結(jié)合。
再次洗滌:重復(fù)洗滌步驟,,去除未結(jié)合的酶標(biāo)抗體,。
顯色:向每孔加入底物工作液,輕輕振蕩混勻,,將微孔板置于 37℃避光環(huán)境孵育,,此時酶標(biāo)抗體上的酶會催化底物顯色,顏色會逐漸變深,。
終止反應(yīng):當(dāng)顯色達(dá)到預(yù)期效果,,加入終止液終止反應(yīng),。溶液顏色隨即固定,,應(yīng)立刻使用酶標(biāo)儀在特定波長下測定各孔吸光度值。
結(jié)果計算:根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,,依據(jù)樣本的吸光度值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出對應(yīng)的絲氨/酸蛋白酶濃度,,并結(jié)合樣本的稀釋倍數(shù)進(jìn)行校正,最終得出樣本中絲氨/酸蛋白酶的實(shí)際濃度,。