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人熱休克蛋白60試劑盒
人熱休克蛋白60試劑盒必須為液體,，不含沉淀。包括血清,、血漿,、尿液、胸腹水,、腦脊液,、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等,。1ml的全血可得到0.5ml的血清或血漿,。每個(gè)標(biāo)本量收集體積＝100ul×檢測(cè)種類。
培養(yǎng)基 :"*培養(yǎng)基有售，用我們拜力生物的*培養(yǎng)基,，細(xì)胞培養(yǎng)更省心,！"
供應(yīng)商 :拜力生物
貨期 :7-10天
1. 試劑準(zhǔn)備：所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫，使用后請(qǐng)立即按照說明書要求保存試劑,。 實(shí)驗(yàn)操作中請(qǐng)使用一次性的吸頭,，避免交叉污染。
2. 加樣：加樣或加試劑時(shí),，請(qǐng)注意在吸取標(biāo)本 / 標(biāo)準(zhǔn)品,，酶結(jié)合物或底物時(shí)，前一個(gè)孔與后一個(gè)孔加樣之間的時(shí)間間隔如果太大,，將會(huì)導(dǎo)致不同的 “預(yù)孵育"時(shí)間,，從而明顯地影響到測(cè)量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。一次加樣時(shí)間(包括標(biāo)準(zhǔn)品及所有樣品)好控制在10分鐘內(nèi),，如標(biāo)本數(shù)量多,，推薦使用多道移液器加樣。
3. 孵育：為防止樣品蒸發(fā),，試驗(yàn)時(shí)將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi),，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發(fā),；洗板后應(yīng)盡快進(jìn)行下步操作,，任何時(shí)侯都應(yīng)避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài);同時(shí)應(yīng)嚴(yán)格遵守給定的孵育時(shí)間和溫度。
4. 洗滌：洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干,，勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水,，同時(shí)要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響后的酶標(biāo)儀讀數(shù),。
5. 試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請(qǐng)手甩幾下或少時(shí)離心處理,，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底,。標(biāo)準(zhǔn)品,、檢測(cè)溶液A工作液、檢測(cè)溶液B工作液請(qǐng)依據(jù)所需的量配置使用,，并使用相應(yīng)的稀釋液配制,，不能混淆。請(qǐng)確配置標(biāo)準(zhǔn)品及工作液,，盡量不要微量配置(如吸取檢測(cè)溶液A時(shí),，一次不要小于10μl)，以避免由于不準(zhǔn)確稀釋而造成的濃度誤差,；請(qǐng)勿重復(fù)使用已稀釋過的標(biāo)準(zhǔn)品,、檢測(cè)溶液A工作液或檢測(cè)溶液B工作液。
6. 反應(yīng)時(shí)間的控制：加入底物后請(qǐng)定時(shí)觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如，每隔10分鐘),，如顏色較深,，請(qǐng)?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)，避免反應(yīng)過強(qiáng)從而影響酶標(biāo)儀光密度讀數(shù),。
7. 底物：底物請(qǐng)避光保存,，在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。
建議檢測(cè)樣品時(shí)均設(shè)雙孔測(cè)定,，以保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性,。
如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高，請(qǐng)先稀釋后再測(cè)定,，計(jì)算時(shí)請(qǐng)后乘以稀釋倍數(shù),。
要產(chǎn)品包括限制性內(nèi)切酶，聚合酶,，修飾酶,，各種載體， Marker ,， 引物,，測(cè)序，基因突變系統(tǒng),，噬菌體呈現(xiàn),，蛋白質(zhì)工具（蛋白激酶，磷酸酶,，糖生物學(xué),，蛋白酶）。該公司產(chǎn)品線主要分為以下九大方面：①限制性內(nèi)切酶,；②聚合酶與擴(kuò)增技術(shù),；③DNA修飾酶與克隆技術(shù)；④核酸,；⑤RNAi與RNA酶,；⑥基因表達(dá)和蛋白純化技術(shù)；⑦感受態(tài)細(xì)胞,；⑧蛋白質(zhì)工具,；⑨表觀遺傳學(xué)。
◇ 液體類標(biāo)本
標(biāo)本必須為液體,，不含沉淀,。包括血清、血漿,、尿液,、胸腹水,、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清,、組織勻漿等,。1ml的全血可得到0.5ml的血清或血漿。每個(gè)標(biāo)本量收集體積＝100ul×檢測(cè)種類,。
◇ 血清：
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。收集上清,。如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心。
◇ 血漿：
應(yīng)根據(jù)試劑盒的要求選擇EDTA,、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,，加入10％(v/v)抗凝劑(0.1M檸檬酸鈉或1% heparin 或2.0%EDTA.Na2)混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清,。如有沉淀形成，應(yīng)再次離心,。
◇ 尿液,、胸腹水、腦脊液：
用無菌管收集,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清。如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心,。
◇ 細(xì)胞培養(yǎng)上清：
檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無菌管收集,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),，用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融,，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清,。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心,。
【生物分子】 抗生素/抗真菌素 維生素 氨基酸 核苷酸 脂 糖類 白三烯 前列腺素 藥物結(jié)合物 抗氧化劑 藥理活性化合物 類固醇激素結(jié)合物 半抗原反應(yīng) 半抗原載體結(jié)合物 放射性核素 血小板活化素 tRNA 活性染料和化合物 親和素/鏈霉親和素
【蛋白質(zhì)/抗原/多肽】 免疫球蛋白 封閉肽 人蛋白和抗原 小鼠蛋白和抗原 細(xì)菌蛋白和抗原 病毒蛋白和抗原 植物蛋白和抗原 其它蛋白和抗原 細(xì)胞質(zhì)蛋白 總蛋白 膜蛋白 核蛋白 細(xì)胞裂解和提取物 線粒體蛋白 細(xì)胞裂解 組織提取 重組細(xì)胞因子
【常用生化試劑】EDTA DTT Tris SDS MOPS HEPES 水 分子生物學(xué)緩沖液 蛋白生化緩沖液 去垢劑 染色試劑 溶劑 酸堿 化學(xué)試劑 其它生化試劑
收到后,，取出培養(yǎng)瓶在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況。
（一）如果細(xì)胞未長(zhǎng)滿，用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超菌臺(tái)內(nèi),，嚴(yán)格無菌操作,，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶，吸出培養(yǎng)液,，僅留下10ml培養(yǎng)液在瓶?jī)?nèi)繼續(xù)培養(yǎng),。
(二)如果細(xì)胞已長(zhǎng)滿，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。具體步驟如下：
1. 棄去培養(yǎng)液,，用PBS（不含鈣，鎂離子）洗1-2次,。
2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，倒轉(zhuǎn)放于37度培養(yǎng)箱1-3分鐘預(yù)熱，然后又將培養(yǎng)瓶倒轉(zhuǎn)大約30秒后,，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分變圓分散，輕敲幾下培養(yǎng)培養(yǎng)瓶,，細(xì)胞隨即脫落下來,。
3. 加入6-8ml*培養(yǎng)基，吸出,，分到新的培養(yǎng)瓶中,。一傳二。
注意：傳代后一半用我們的培養(yǎng)基,，一半用你們的,，以免細(xì)胞不適應(yīng)而造成生長(zhǎng)不好。