關(guān)鍵詞:免疫熒光(IF)|實驗技術(shù)服務(wù)
簡介：世界*品牌免疫熒光(IF)|實驗技術(shù)服務(wù)原裝，質(zhì)量保證,*,。
免疫熒光(IF)|實驗技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系。
我們具備豐富的蛋白表達設(shè)計經(jīng)驗及實驗操作技巧,，承諾客戶不成功不收費,。我們所有的實驗數(shù)據(jù)真實可信，我們提供原始的表達菌株和克隆質(zhì)粒,，客戶可以依據(jù)我們的實驗報告重復(fù)我們的實驗結(jié)果,。
產(chǎn)品品牌：免疫熒光(IF)|實驗技術(shù)服務(wù)   http://www.。,。ｃｏｍ/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html    
測序?qū)嶒灹鞒蹋?br>免疫熒光技術(shù)是在免疫學(xué),、生物化學(xué)和顯微鏡技術(shù)的基礎(chǔ)上建立起來的一項技術(shù)。它是根據(jù)抗原抗體反應(yīng)的原理,，先將已知的抗原或抗體標(biāo)記上熒光基團,，再用這種熒光抗體（或抗原）作為探針檢查細(xì)胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原（或抗體）,。利用熒光顯微鏡可以看見熒光所在的細(xì)胞或組織，從而確定抗原或抗體的性質(zhì)和定位,，以及利用定量技術(shù)（比如流式細(xì)胞儀）測定含量,。
基本實驗步驟：
（1）細(xì)胞準(zhǔn)備：對單層生長細(xì)胞，在傳代培養(yǎng)時,，將細(xì)胞接種到預(yù)先放置有處理過的蓋玻片的培養(yǎng)皿中,，待細(xì)胞接近長成單層后取出蓋玻片，PBS洗兩次,；對懸浮生長細(xì)胞,，取對數(shù)生長細(xì)胞，用PBS離心洗滌（1000rpm,5min）2次,，用細(xì)胞離心甩片機制備細(xì)胞片或直接制備細(xì)胞涂片,。
（2）固定：根據(jù)需要選擇適當(dāng)?shù)墓潭▌┕潭?xì)胞。固定完畢后的細(xì)胞可置于含疊氮納的PBS中4℃保存3個月,。PBS洗滌3×5 min.
（3）通透：使用交聯(lián)劑（如多聚甲醛）固定后的細(xì)胞,，一般需要在加入抗體孵育前，對細(xì)胞進行通透處理,，以保證抗體能夠到達抗原部位,。選擇通透劑應(yīng)充分考慮抗原蛋白的性質(zhì)。通透的時間一般在5-15min.通透后用PBS洗滌3×5 min.
（4）封閉：使用封閉液對細(xì)胞進行封閉,，時間一般為30min.
（5）一抗結(jié)合：室溫孵育1h或者4℃,。PBST漂洗3次，每次沖洗5min.
（6）二抗結(jié)合：間接免疫熒光需要使用二抗,。室溫避光孵育1h.PBST漂洗3次,，每次沖洗5min后，再用蒸餾水漂洗一次,。
（7）封片及檢測：滴加封片劑一滴,，封片，熒光顯微鏡檢查,。
注意事項：
1,、染完之后沒有封片前直接照一些，因為有的時候可能封片會出現(xiàn)問題,，再想照反而沒有了,，另外不要拖太長時間，熒光會崔滅的,。
2,、熒光的片子一定要避光保存，保存的好的話，過一段時間仍然能照出很好的片子,。
3,、二抗用之前一定離心，不然有的時候有那種沉淀,，在片子上就是一個很大的非特異性熒光光點,，非常難看。
4,、整個操作在4℃下進行,，洗滌液中加有比常規(guī)防腐劑量高10倍的NaN３，上述實驗條件是防止一抗結(jié)合細(xì)胞膜抗原后發(fā)生交聯(lián),、脫落,。
5、洗滌要充分,，以避免游離抗體封閉二抗與細(xì)胞膜上一抗相結(jié)合,，出現(xiàn)假陰性。
6,、加適量正常兔血清可封閉某些細(xì)胞表面免疫球蛋白Fc受體,，降低和防止非特異性染色。
7,、細(xì)胞活性要好,，否則易發(fā)生非特異性熒光染色,?？勾銣鐒┛赡脕碇苯臃馄?20微升即可，之后片子可保留更長時間,。