關(guān)鍵詞:單克隆抗體制備技術(shù)服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)
簡(jiǎn)介：世界*品牌單克隆抗體制備技術(shù)服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)原裝,，質(zhì)量保證,*。
單克隆抗體制備技術(shù)服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達(dá)體系,。
我們具備豐富的蛋白表達(dá)設(shè)計(jì)經(jīng)驗(yàn)及實(shí)驗(yàn)操作技巧,，承諾客戶不成功不收費(fèi)。在獲得重組蛋白產(chǎn)品的同時(shí),，我們也會(huì)提供相應(yīng)的原始數(shù)據(jù)和原始圖片,不需要再額外花費(fèi)精力重復(fù)實(shí)驗(yàn),。另一方面，我們所有的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)真實(shí)可信,，我們提供原始的表達(dá)菌株和克隆質(zhì)粒,，客戶可以依據(jù)我們的實(shí)驗(yàn)報(bào)告重復(fù)我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,。
產(chǎn)品品牌：   http://www.,。。ｃｏｍ/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html    
測(cè)序?qū)嶒?yàn)流程：
其原理是: B淋巴細(xì)胞能夠產(chǎn)生抗體,， 但在體外不能進(jìn)行無限分裂; 而瘤細(xì)胞雖然可以在體外進(jìn)行無限傳代,， 但不能產(chǎn)生抗體。將這兩種細(xì)胞融合后得到的雜交瘤細(xì)胞具有兩種親本細(xì)胞的特性,。
一.提取合成專一性抗體的單個(gè)B淋巴細(xì)胞,，但這種B淋巴細(xì)胞不能在體外生長(zhǎng)。
二.應(yīng)用細(xì)胞雜交技術(shù)使骨髓瘤細(xì)胞與B淋巴細(xì)胞融合,，得到雜交瘤細(xì)胞,。這種細(xì)胞既具有B淋巴細(xì)胞合成專一抗體的特性，也有骨髓瘤細(xì)胞能在體外培養(yǎng)增殖永存的特性
三.對(duì)雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng),，選出所需要的細(xì)胞群,，體外或體內(nèi)培養(yǎng)，從培養(yǎng)液或動(dòng)物腹水中提取單克隆抗體
單克隆抗體的提純
一般常用金黃色葡萄球菌蛋白A-瓊脂糖4B親和層析法,。
單克隆抗體的保存 由腹水中獲得的抗體,經(jīng)離心去除細(xì)胞成分,，再經(jīng)冷凍超速離心,取上清液加0.1%NaN3，少量分裝,，冷凍于-70℃可保存幾年,。 但應(yīng)避免反復(fù)凍融,否則抗體失活，特別是IgM抗體,。提純的單克隆抗體,冷凍干燥保存于2~8℃,，取出時(shí)溶解后，保存于2~8℃,，至少一個(gè)月內(nèi)可保持穩(wěn)定,。腹水抗體也可冷凍干燥低溫(4℃)保存兩年，融化后放置4℃下保存一個(gè)月。短期使用的腹水抗體,，4℃3~4 個(gè)月仍保持穩(wěn)定, 培養(yǎng)上清加0.1%NaN3,，貯于-20℃，兩年不失活性,。
特點(diǎn):
一是特異性,，針對(duì)特定的單一抗原表位，它具有高度的特異性,，抗腫瘤抗體藥物的研究表明,，其特異性主要表現(xiàn)為特異性結(jié)合、選擇性殺傷靶細(xì)胞,、體內(nèi)靶向性分布以及具有更強(qiáng)的療效,。
二是多樣性，主要表現(xiàn)在靶抗原的多樣性,、抗體結(jié)構(gòu)的多樣性,、作用機(jī)制的多樣性等方面。
三是定向性,，抗體藥物可以定向制造,，就是根據(jù)需要制備具有不同治療作用的抗體藥物。
1 骨髓瘤細(xì)胞的準(zhǔn)備
選擇生長(zhǎng)狀態(tài)良好的SP2/0細(xì)胞,，覆蓋瓶底80％時(shí)棄上清,，以不*培養(yǎng)基洗滌一次后，用l0 mL不*培養(yǎng)基將細(xì)胞輕輕吹下,。
2 脾淋巴細(xì)胞的準(zhǔn)備
取加強(qiáng)免疫后3天的小鼠,，摘除眼球采血作為陽(yáng)性血清；頸脫臼將小鼠致死,，用75%酒精消毒體表10 min,，隨即放入超凈臺(tái)內(nèi)的解剖板上，腹部朝上,，四肢固定,；無菌打開腹腔取出脾臟，用基礎(chǔ)培養(yǎng)基洗滌,，并仔細(xì)去掉周圍附著的結(jié)締組織,；隨后將脾臟轉(zhuǎn)移到另一個(gè)盛有DMEM的平皿中。用研磨棒擠壓,，使脾細(xì)胞充分釋放,，制成脾細(xì)胞懸液。
3 飼養(yǎng)細(xì)胞的制備
取一只成熟健康的ICR小鼠,，摘眼球采血作為陰性血清,，頸脫臼處死,；體表消毒和固定后，暴露腹膜,，酒精棉球消毒腹膜,；用l0 mL注射器，12#針頭,，吸取10 mL HAT培養(yǎng)基到腹腔,，右手固定注射器，左手持酒精棉球輕輕按摩腹部,，抽回腹腔內(nèi)液體,，注入己準(zhǔn)備好的容器中。
4 融合
將上述制備的骨髓瘤細(xì)胞與脾細(xì)胞混合于一支50 mL的帶蓋的融合管中,，1000 rpm離心10 min,，棄上清。將融合管置于手掌中,，輕輕摩擦底部,，使兩種細(xì)胞充分混勻；在37°C水浴中45 s內(nèi)緩慢加入1 mL預(yù)熱的PEG-1500到融合管中,，邊加邊輕輕搖勻,；隨即在90 s內(nèi)先慢后快滴加30 mL 37°C預(yù)熱的不*DMEM培養(yǎng)基,，使PEG稀釋而失去作用,，37°C靜置10 min，1000 rpm離心10 min,；棄上清,，用60 mL HAT培養(yǎng)基輕輕懸浮沉淀細(xì)胞，再加入適量的腹腔巨噬細(xì)胞,；分裝于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板,，然后將培養(yǎng)板置37°C 6% CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)；5 d后用新鮮的HAT培養(yǎng)基換出一半培養(yǎng)基,；10 d后用預(yù)熱的HT換出HAT,；觀察雜交瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)情況，待其細(xì)胞培養(yǎng)上清變黃或克隆分布至孔底面積的1/10以上時(shí),，吸取適量細(xì)胞上清進(jìn)行ELISA檢測(cè),兩次檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性設(shè)為陽(yáng)性克隆孔,。
雜交瘤細(xì)胞的克隆化及建株
采用有限稀釋法對(duì)連續(xù)兩次檢測(cè)為陽(yáng)性的細(xì)胞株進(jìn)行克隆化。陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù),，取100個(gè)細(xì)胞放入5 mL含飼養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)液中,，即20個(gè)細(xì)胞/mL，100 μL/孔滴加于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板,，即每孔1個(gè)細(xì)胞：再將余下的細(xì)胞懸液倍比稀釋,，細(xì)胞數(shù)為10 個(gè)/mL,，100 μL /孔滴加于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，即每孔0.5個(gè)細(xì)胞,。第8～9 d時(shí),，肉眼可見細(xì)胞克隆，對(duì)出現(xiàn)單個(gè)細(xì)胞克隆的孔再按篩選陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞的間接ELISA方法進(jìn)行篩選,。連續(xù)進(jìn)行三次以上亞克隆,，判為陽(yáng)性的細(xì)胞株擴(kuò)大培養(yǎng)，建株凍存,。