關鍵詞:Transwell細胞遷移實驗|實驗技術服務
簡介：世界*品牌Transwell細胞遷移實驗|實驗技術服務原裝,，質(zhì)量保證,*,。
Transwell細胞遷移實驗|實驗技術服務——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系,。
我們具備豐富的蛋白表達設計經(jīng)驗及實驗操作技巧,，承諾客戶不成功不收費,。在獲得重組蛋白產(chǎn)品的同時,，我們也會提供相應的原始數(shù)據(jù)和原始圖片,不需要再額外花費精力重復實驗,。另一方面,，我們所有的實驗數(shù)據(jù)真實可信，我們提供原始的表達菌株和克隆質(zhì)粒,，客戶可以依據(jù)我們的實驗報告重復我們的實驗結果,。
產(chǎn)品品牌：   http://www.。,。ｃｏｍ/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html    
測序?qū)嶒灹鞒蹋?br>1材料準備：
可拍照顯微鏡,，Transwell小室，孔徑8μm,，沒包被膠的(Coster和Corning公司的也較常用),，Transwell遷移實驗的細胞培養(yǎng)板24孔板。細胞培養(yǎng)板應當與購買的Transwell小室相配套,，BD公司的Matrigel,，無血清DMEM，(1%胎牛血清)DMEM和1640培養(yǎng)基,，DMEM*培養(yǎng)基,，1640*培養(yǎng)基（也可加到20%血清），無菌PBS,，棉簽,，胰酶（0.25?TA胰酶），4%多聚甲醛固定液或者甲醇,，結晶紫染液（0.1%（g/ml）PBS結晶紫）
2步驟和流程
2.1基質(zhì)膠鋪板：
用BD公司的Matrigel 1：8（根據(jù)細胞產(chǎn)生mmp的量來決定）稀釋,，包被Transwell小室底部膜的上室面,，置37℃30min使Matrigel聚合成凝膠,。使用前進行基底膜水化。
2.2制備細胞懸液
①制備細胞懸液前可先讓細胞撤血清饑餓12－24h,，進一步去除血清的影響,。但這一步并不是必須的。
②消化細胞,，終止消化后離心棄去培養(yǎng)液,，（用PBS洗1－2遍），用含BSA的無血清（或者1?S）培養(yǎng)基重懸,。調(diào)整細胞密度至5×105/ml,。
2.3接種細胞
①取細胞懸液100μl加入Transwell小室,。
② 24孔板下室一般加入600μl含20?S的培養(yǎng)基，特別注意的是,，下層培養(yǎng)液和小室間常會有氣泡產(chǎn)生,，一旦產(chǎn)生氣泡，下層培養(yǎng)液的趨化作用就減弱甚至消失了,，在種板的時候要特別留心,，一旦出現(xiàn)氣泡，要將小室提起,，去除氣泡,，再將小室放進培養(yǎng)板。
③培養(yǎng)細胞：常規(guī)培養(yǎng)12－48h（主要依癌細胞侵襲能力而定）,。24h較常見,，時間點的選擇除了要考慮到細胞細胞侵襲力外，處理因素對細胞數(shù)目的影響也不可忽視,。
2.4結果統(tǒng)計
直接計數(shù)法,，“貼壁"細胞計數(shù)，這里所謂的“貼壁"是指細胞穿過膜后,，可以附著在膜的下室側而不會掉到下室里面去,，通過給細胞染色，可在鏡下計數(shù)細胞,。
取出Transwell小室,，棄去孔中培養(yǎng)液，用無鈣的PBS洗2遍,，甲醇固定30分鐘,，將小室適當風干。
0.1%結晶紫染色20 min,，用棉簽輕輕擦掉上層未遷移細胞,，用PBS洗3遍。
400倍顯微鏡下隨即五個視野觀察細胞,，記數(shù),。