離心機(jī)是生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中*的儀器,看似通用的儀器,,卻是有許多學(xué)問的,,實(shí)驗(yàn)操作中我們需要了解離心機(jī)知識(shí),能夠合理利用它而更穩(wěn)定地為我們的實(shí)驗(yàn)服務(wù),。
離心機(jī)作為一種實(shí)驗(yàn)室通用儀器,,幾乎每個(gè)實(shí)驗(yàn)室都會(huì)配置一到兩臺(tái)甚至數(shù)臺(tái)。大家對(duì)其并不陌生,,我們整理了一些關(guān)于離心機(jī)及其轉(zhuǎn)子種類的資料分享給大家,。
一、離心技術(shù)的基本原理
1,、離心力(force, F)
F = m * a = m * ω2r2
a:粒子旋轉(zhuǎn)的加速度
m:粒子的有效質(zhì)量,,g為單位
ω:粒子旋轉(zhuǎn)的角速度,弧度/s為單位
r:粒子的旋轉(zhuǎn)半徑,,cm為單位
2,、相對(duì)離心力(relative centrifuge force, RCF)
通常離心力常用地球引力(g)的倍數(shù)來(lái)表示,,因而稱為相對(duì)離心力(RCF),。常用數(shù)字×g來(lái)表示,例如13000g表示相對(duì)離心力為13000,。相對(duì)離心力指在離心場(chǎng)中,,作用與顆粒的離心力相當(dāng)于地球重力的倍數(shù),單位是重力加速度g(980cm/s2),。
RCF = ma/mg = mω2r2/mg = ω2r2/g
∵ω = 2π× (rpm)/60
∴RCF = 1.119 × 10-5 × (rpm)2r
rpm:revolutions per minute為每分鐘轉(zhuǎn)數(shù)
由上式可知,,只要給出旋轉(zhuǎn)半徑r,則RCF和rpm之間可以相互換算,。
由于轉(zhuǎn)頭的形狀及結(jié)構(gòu)的差異,,每臺(tái)離心機(jī)的離心管從管口至管底的各點(diǎn)與旋轉(zhuǎn)軸之間的距離是不一樣的,所以在計(jì)算時(shí)規(guī)定旋轉(zhuǎn)半徑均用平均半徑rav代替,,即大半徑rmax和小半徑rmin的平均值,。
一般,低速離心時(shí)常以轉(zhuǎn)速rpm來(lái)表示,,高速離心時(shí)則以g表示,。報(bào)告離心條件時(shí)使用RCF比rpm要科學(xué),因?yàn)樗梢哉鎸?shí)地反映顆粒在離心管內(nèi)不同位置的離心力及其動(dòng)態(tài)變化,。
WIGGENS離心機(jī)均有RPM和RCF雙顯示功能,,操作者可以一目了然的看到轉(zhuǎn)速和離心力。
二,、離心機(jī)的種類
離心機(jī)按用途分為工業(yè)用離心機(jī)和實(shí)驗(yàn)用離心機(jī),。后者根據(jù)功能又分為制備性離心機(jī)和分析性離心機(jī),。制備性離心機(jī)一般用來(lái)分離各種生物材料,分離的樣品量比較大,,也是大多數(shù)科研實(shí)驗(yàn)室配備的離心機(jī)種類,。分析性離心機(jī)常用來(lái)研究純的生物大分子和顆粒的理化性質(zhì),一般有光學(xué)系統(tǒng),,可監(jiān)測(cè)粒子在離心場(chǎng)中的行為,,能推斷物質(zhì)的純度、形狀和分子量等,,且都是超速離心機(jī),。此處和大家分享下幾種實(shí)驗(yàn)室常用的制備性離心機(jī)。
制備性離心機(jī)根據(jù)轉(zhuǎn)速可分為普通離心機(jī),、高速離心機(jī),、超速離心機(jī)等。具體如下:
1,、普通離心機(jī)
大轉(zhuǎn)速6000rpm左右,,大RCF接近6000g,容量為幾十毫升至幾升,,分離形式是固液沉降分離,,其轉(zhuǎn)速不能嚴(yán)格控制,通常不帶冷凍系統(tǒng),,室溫操作,,用于收集易沉淀的大顆粒物質(zhì),如:細(xì)胞等,。在細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室常常能見到,。
WIGGENS的UNICEN21系列臺(tái)式通用離心機(jī),提供了九種可選轉(zhuǎn)頭,,每種轉(zhuǎn)頭根據(jù)客戶的具體應(yīng)用不同,,配以不同的適配器,可以解決您幾乎所有的實(shí)驗(yàn)室通用性離心的需要,。
UNICEN21離心機(jī)
2,、高速離心機(jī)
轉(zhuǎn)速為2000-25000rpm,大RCF為89000×g,,大容量可達(dá)3L,,一般都有制冷系統(tǒng),以消除高速旋轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)頭與空氣之間摩擦而產(chǎn)生的熱量,,離心室的溫度可以調(diào)節(jié)和維持在0℃-4℃,,可以嚴(yán)格準(zhǔn)確的控制轉(zhuǎn)速溫度和時(shí)間,并有指針或數(shù)字顯示。通常用于微生物菌體,、細(xì)胞碎片,、大細(xì)胞器、硫酸銨沉淀和免疫沉淀物等的分離純化工作,,但不能有效地沉降病毒,、小細(xì)胞器或單個(gè)分子。高速離心機(jī)是實(shí)驗(yàn)室中常見的離心機(jī)類型,,一般的分子實(shí)驗(yàn)室都會(huì)配備,。
WIGGENS的MICROCEN和BIOCEN系列高速離心機(jī),是實(shí)驗(yàn)室高速,,小量樣品離心操作的理想選擇,。
MICROCEN高速離心機(jī) BIOCEN高速離心機(jī)
3、超速離心機(jī)
轉(zhuǎn)速可達(dá)50000-80000rpm,,RCF高可達(dá)510000×g,,離心容量由幾十毫升至2升,分離形式為差速沉降分離和密度梯度區(qū)帶分離,,需嚴(yán)格配平(誤差<0.1g),。與高速離心機(jī)的主要區(qū)別是增加了真空系統(tǒng)。常用于分離亞細(xì)胞器,、病毒,、核酸、蛋白質(zhì)和多糖等,。超速離心機(jī)價(jià)格較高,,一般只有大型實(shí)驗(yàn)室或公共平臺(tái)才進(jìn)行配備,。
三,、離心機(jī)轉(zhuǎn)子的種類
離心機(jī)的轉(zhuǎn)子是其主要的工作部件,一臺(tái)離心機(jī)的全套轉(zhuǎn)子甚至比離心機(jī)主機(jī)還要貴,。且轉(zhuǎn)子的規(guī)格,、品種的多少也是衡量離心機(jī)生產(chǎn)技術(shù)掌握程度的重要標(biāo)志,常見的轉(zhuǎn)子類型主要為固定角轉(zhuǎn)子,、水平轉(zhuǎn)子,。此外還有區(qū)帶轉(zhuǎn)子、連續(xù)流動(dòng)轉(zhuǎn)子,、垂直轉(zhuǎn)子等,,這些類型的轉(zhuǎn)子并不常用,我們?cè)谶@里就不做介紹了,。
1,、固定角轉(zhuǎn)子
離心管與轉(zhuǎn)子的轉(zhuǎn)軸之間有一定的角度,角度變化范圍通常在14°-45°,,如下圖1,。此種轉(zhuǎn)子重心低,,壽命長(zhǎng),容量較大,,轉(zhuǎn)速較高,,能承受的大離心力可達(dá)800000g。主要用于分離沉降速度有明顯差異的顆粒樣品,。顆粒在扇形溶液移動(dòng)的距離很短,,碰到外壁的顆粒沿著管壁滑到管底,形成沉淀,,因此這種轉(zhuǎn)子能很快地收集沉淀物,。分離過程中,由于管壁的作用,,在離心管內(nèi)將會(huì)引起強(qiáng)烈的對(duì)流,,對(duì)具有相同沉降速率的顆粒會(huì)產(chǎn)生不良影響,如圖2,。
圖1 不同孔徑的固定角轉(zhuǎn)子
圖2 固定角轉(zhuǎn)子顆粒離心過程示意圖
2,、水平轉(zhuǎn)子
又稱甩平轉(zhuǎn)子、蕩平轉(zhuǎn)子,。轉(zhuǎn)頭靜止時(shí),,處于轉(zhuǎn)頭中的離心管中心線與旋轉(zhuǎn)軸平行。轉(zhuǎn)頭旋轉(zhuǎn)加速時(shí),,離心管中心線由平行位置逐漸過渡到垂直位置,,即與旋轉(zhuǎn)軸成90°角。此種轉(zhuǎn)子主要用于樣品做密度梯度離心,。顆粒移動(dòng)距離長(zhǎng),,相應(yīng)離心時(shí)間一般也較長(zhǎng),溶液中的組分相對(duì)于管壁的位置在離心過程中和離心后不發(fā)生改變,,因此離心效果好,,但因顆粒在離心場(chǎng)中是從旋轉(zhuǎn)中沿徑向散離出去,而不是按相互平行的路線沉降,。顆粒碰到外壁沿著管壁滑到管底,,因此也會(huì)產(chǎn)生對(duì)流,但比固定角轉(zhuǎn)子小,,如圖4,。低速啟動(dòng)或停機(jī)時(shí)會(huì)產(chǎn)生振動(dòng),影響分離效果,。水平轉(zhuǎn)子又分為敞開式和封閉式兩種,,一般制備容量大,轉(zhuǎn)速小于10000rpm,離心力場(chǎng)在16000×g以內(nèi)的,,作為敞開式,,主要用于樣品的初分離。制備容量較前者小,,轉(zhuǎn)速大于10000rpm,,離心力場(chǎng)在16000×g以上的,為了減少風(fēng)力的影響,,一般作為封閉式,,主要用于線粒體、葉綠體,、細(xì)胞核等的分離和密度梯度離心,。此外,用于離心酶標(biāo)板的轉(zhuǎn)子也可歸納為水平轉(zhuǎn)子,,如下圖3,。
圖3 幾種常見的水平轉(zhuǎn)子及其適配器
圖4 水平轉(zhuǎn)子顆粒離心過程示意圖
WIGGENS在各型離心機(jī)中均配備完善的轉(zhuǎn)子類型和各種適配器,保證了客戶可以大限度的實(shí)現(xiàn)了一機(jī)多用功能,。
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