哺乳動物細(xì)胞培養(yǎng)過程
哺乳動物細(xì)胞在培養(yǎng)過程中會經(jīng)過組織提取,,原代培養(yǎng),傳代培養(yǎng)等過程,。傳代培養(yǎng)會根據(jù)具體情況分為細(xì)胞株培養(yǎng)和細(xì)胞系培養(yǎng),。如下對各個過程進(jìn)行簡述:
原代培養(yǎng):從動物機(jī)體取出組織后切碎,經(jīng)過各種酶(常用胰蛋白酶),,螯合劑(常用EDTA)結(jié)合機(jī)械方法(吸液管反復(fù)吸吹)處理,,分散成單細(xì)胞,置于合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng),,使細(xì)胞得以生存,、生長和繁殖。一般把從動物有機(jī)體內(nèi)取出細(xì)胞開始培養(yǎng),,到繁殖十代以內(nèi)的細(xì)胞培養(yǎng)稱為原代細(xì)胞培養(yǎng),。
經(jīng)過原代細(xì)胞培養(yǎng),細(xì)胞分裂繁殖,,培養(yǎng)物逐漸增多長滿培養(yǎng)空間,,繼而相互之間接觸,發(fā)生接觸抑制現(xiàn)象,,生長速度逐漸減慢甚至停止,。需要重新接種到新的培養(yǎng)瓶內(nèi)進(jìn)行傳(繼)代培養(yǎng)。
傳(繼)代培養(yǎng):將原代細(xì)胞從培養(yǎng)瓶中取出,,配制成細(xì)胞懸浮液,,分裝到兩個或兩個以上的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng),稱為傳(繼)代培養(yǎng),。
細(xì)胞系:初代培養(yǎng)物開始次傳代培養(yǎng)后的細(xì)胞,,即稱之為細(xì)胞系,。如果細(xì)胞系的生存期有限,則稱為有限細(xì)胞系,。已獲得無限繁殖能力,,能持續(xù)生存的細(xì)胞系稱為連續(xù)細(xì)胞系或無限細(xì)胞系。
細(xì)胞株:從一個經(jīng)過生物學(xué)鑒定的細(xì)胞系,,用單細(xì)胞分離培養(yǎng)或通過篩選的方法,,由單細(xì)胞增值形成的細(xì)胞群,稱為細(xì)胞株,。再由原細(xì)胞株進(jìn)一步分離培養(yǎng)出與原珠形狀不同的細(xì)胞群,,成為亞株。
哺乳動物細(xì)胞培養(yǎng)條件
不同哺乳動物細(xì)胞在各個階段的培養(yǎng),,都需要有基礎(chǔ)的培養(yǎng)條件,,歸納如下:
1、無菌無毒的環(huán)境:對培養(yǎng)液和所有培養(yǎng)用具無菌處理,;培養(yǎng)液中添加抗生素防止培養(yǎng)過程中污染,;定期更換培養(yǎng)液以清除代謝產(chǎn)物,防止對培養(yǎng)細(xì)胞造成危害,。
2,、營養(yǎng):液體合成培養(yǎng)基包含糖、氨基酸,、促生長因子,、水、無機(jī)鹽,、微量元素等,;通常還需加入血漿、血清等天然成分
3,、適宜的溫度和pH:人和哺乳動物細(xì)胞適宜溫度大多為36±0.5℃,。適宜的酸堿度為pH 7.2-7.4。
4,、氣體環(huán)境:氣體環(huán)境一般為“95% 空氣+5% CO2”混合氣體,。氧氣是細(xì)胞代謝必須氣體,CO2維持培養(yǎng)液pH,。
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