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基因工程試劑 DH5α感受態(tài)細胞
貨 號：C1100
規(guī) 格：10×100ul / 20×100ul
保 存：-70℃保存，運輸為干冰包裝,。自收貨之日起液氮保存少一年,，-70℃保存少6個月。
產品簡介：
本公司生產的DH5α感受態(tài)細胞是采用大腸桿菌DH5α菌株經特殊工藝制備得到，可用于DNA的化學轉化,。使用pUC19 質粒檢測，轉化效率可達 10 8 ，-70℃保存 3-5 個月轉化效率不發(fā)生改變,。
基因型: supE44△lacU169（φ80 lacZ△M15）hsdR17 recA1 end A1 gyrA96 thi-1 relA1
特 點: 一種用于鋪制與培養(yǎng)質粒平板和粘粒平板的重組缺陷的抑制型菌株,。其 φ80 lacZ△M15 基因的產物可與 pUC 載體編碼的 β-半乳糖苷酶氨基端實現(xiàn) β 互補,，可用于藍白斑篩選,。
操作方法：（以下操作均按無菌條件的標準進行）
1,、將感受態(tài)細胞置于冰上融化,，以下實驗以 100ul 感受態(tài)細胞為例,。
2、向感受態(tài)細胞懸液中加入需轉化的目的 DNA,，注意目的 DNA 的體積不要超過感受態(tài)細胞懸液體積的十分之一,，輕輕旋轉離心管以混勻內容物,，冰浴放置 30 分鐘,。
3,、將離心管置于 42℃水浴中 60-90 秒，然后快速轉移到冰浴中放置 2-3 分鐘,，注意不要搖動離心管,。
4,、向離心管中加入 500ul 無菌無抗的 SOC 或 LB 培養(yǎng)基，37℃ 180rpm 振蕩培養(yǎng) 1 小時,。目的是使質粒上相關的抗性標記基因表達,，使菌體復蘇。
5,、取適量已轉化的感受態(tài)細胞涂布含相應抗生素的 SOC 或 LB 平板,，37℃倒置培養(yǎng) 12-16 小時。涂布用量可根據具體實驗來調整,，如轉化的 DNA 總量較多,，可取 100ul 左右的轉化產物涂板；反之,，如轉化的 DNA總量較少,，可取 200-300ul 的轉化產物涂板,。過多菌液可以抑制細菌生長。如果預計的克隆較少,，可通過離心后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于一個平板中,。涂布剩余的菌液可 4℃保存,，如果次日的轉化菌落數過少,，可以將剩下的菌液再涂布新的平板,。
注意事項：
1、感受態(tài)細胞應保存在-70℃,，不可反復凍融,，否則其轉化效率將會降低。
2,、實驗過程中應嚴格無菌操作，防止其它 DNA 或雜菌的污染,，避免為以后的篩選、鑒定帶來影響,。
3,、轉化時，轉化效率與外源 DNA 的濃度在一定范圍內成正比,，但當加入的外源 DNA 量過多或體積過大反而會降低轉化效率,。轉化時 DNA 體積要小于感受態(tài)細胞體積的十分之一,。
4,、轉化率的計算：轉化率＝產生菌落的總數/鋪板 DNA 總量。
5,、為防止轉化實驗不成功,，可以保留部分連接產物,，以重新轉化,，將損失降到低。
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基因工程試劑 DH5α感受態(tài)細胞訂購說明：
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2、部分非常用產品,，需提前1－2日預訂，海外期貨則需要提前3-6周預訂,。
3,、部分產品價格會因貨期,、批次等因素發(fā)生變化,，若有變動以訂貨當日新價格為準,。
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