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β-1,3葡聚糖酶（β-1,3-GA）檢測試劑盒

操作步驟：

一,、粗酶液提?。悍Q取約 0.2g 組織，剪碎,，放入預(yù)冷的研缽中,，加入 1.0 mL 提取液進行冰浴勻漿,，12000g，4℃,，離心 10min,，取上清，置冰上待測,。

二,、測定步驟

1、分光光度計或酶標儀預(yù)熱 30min 以上,，調(diào)節(jié)波長 540nm,，蒸餾水調(diào)零。

2,、樣本測定,，（在 1.5mL EP 管中依次加入下列試劑）：試劑名稱（μL） 測定管 對照管 標準管樣本或標準液 35 35 35 雙蒸水 35 35 試劑一 35 充分混勻，放入 37℃水浴 60 min 試劑二 230 230 230取 200μL 微量石英比色皿或 96 孔板中,， 540nm 處記錄各管吸光值 A，如果吸光值大于 2,，可以用蒸餾水稀釋后測定,，ΔA=A 測定-A 對照。

β-1,3葡聚糖酶（β-1,3-GA）檢測試劑盒

β-1,3-GA 活性計算：根據(jù)標準管吸光度（x）和濃度（y,，mg/ml）建立標準曲線,，將ΔA 帶入公式中計算出樣品中產(chǎn)生的還原糖的含量 y 值（mg/ml）（1） 按蛋白濃度計算單位的定義：每 mg 組織蛋白每小時產(chǎn)生 1mg 還原糖定義為一個酶活性單位。 β-1,3-GA(U/mg prot)=(y×V1)÷(V1×Cpr)=y ÷Cpr （2） 按樣本鮮重計算單位的定義：每 g 組織每小時產(chǎn)生 1mg 還原糖定義為一個酶活性單位,。 β-1,3-GA(U /g 鮮重)=(y×V1)÷(W×V1÷V2)=y ÷W (3) 按細菌或細胞密度計算單位的定義：每 1 萬個細胞或細菌每小時產(chǎn)生 1mg 還原糖定義為一個酶活性單位,。 β-1,3-GA(U /g 鮮重)=( y×V1)÷(500×V1÷V2)=0.002×y V1：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.035mL,；V2：加入提取液體積,，1mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度,， mg/mL,；W：樣本鮮重，g,。

提取液：液體 100mL×1 瓶,，4℃保存；試劑一：粉劑×1 瓶,，4℃保存,；臨用前每瓶加入 3.5mL 雙蒸水，充分溶解待用,；試劑二：液體 30mL×1 瓶,，4℃保存,；標準品：粉劑×1 支，4℃保存,，含 10mg 無水葡萄糖（干燥失重<0.2%）,，臨用前加入 1ml 蒸餾水溶解，配制成 10mg/ml 葡萄糖溶液備用,，4℃可保存 1 周,，或者用飽和苯甲酸溶液溶解，可保存更長時間,。標準品準備：將標準品用蒸餾水稀釋 1,、0.8、0.6,、0.4,、0.2mg/ml。

相關(guān)文獻：

《The antifungal activity of a thaumatin-like protein from oyster Crassostrea gigas》 作者:X Niu,Q Xu,W Wang,Z Yu,Z Liu,C Qu,Y Liu,C Gong,L Wang,L Song 期刊:Invertebrate Survival Journal 影響因子:0.967 PMID: