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RPMI Medium 1640 細(xì)胞培養(yǎng)

細(xì)胞復(fù)蘇實驗準(zhǔn)備：

主要器材：一次性滴管、打火機(jī),、酒精燈,、大鑷子、中鑷子,、記號筆,、廢液缸、封口膜,、剪子,。

主要試劑： PBS、培養(yǎng)液,、消化酶（胰酶）,、75%酒精、雙抗,。

PBS配制：NaCL :4g   KCL:0.1g   Na2HPO4 :1.745g   KH2PO4 :0.1g

三蒸水： 500mL,，溶解后高壓滅菌。

培養(yǎng)基配制：5mL雙抗,、50mL血清,，加入培養(yǎng)基中。

細(xì)胞復(fù)蘇操作步驟：

1.佩戴眼鏡和手套,，從液氮罐中取出安瓿或冷凍管,。

2.迅速放入38℃水浴中，并不時搖動,，在1分鐘內(nèi)使其*融化,，然后在無菌下取出細(xì)胞。

3.在1000r/min速度下離心5～10分鐘,，棄去上層液,，加入適量培養(yǎng)液后接種于培養(yǎng)瓶中，接種濃度1×109/L,，置37℃溫箱靜置培養(yǎng),，次日更換一次培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng),，觀察生長情況,。若細(xì)胞密度較高，及時傳代,?；驘o需離心直接將細(xì)胞加入瓶中，并加入培養(yǎng)基貼壁培養(yǎng)12～24小時后,，充去上清,，換入新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

平時研究用的細(xì)胞,，有需要冷凍保存,。冷凍的過程稱為凍存，把凍上的細(xì)胞化開的過程叫細(xì)胞復(fù)蘇,。細(xì)胞復(fù)蘇是一簡單的試驗操作,，但操作中有許多需要注意的事項，在實驗操作中注意細(xì)小問題,，才能使復(fù)蘇后的細(xì)胞狀態(tài)保持良好,。

RPMI Medium 1640 細(xì)胞培養(yǎng)