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細胞培養(yǎng)試劑人或各種動物外周血及臟器組織中性粒細胞分離液
規(guī)格：200ml/kit
保存：室溫避光儲存，有效期少 2 年,。
產(chǎn)品簡介：
本品為帶有乳光或微乳光的滅菌水溶液。主要成分是Ficoll 400與泛影酸葡甲胺,。適用于從人或各種動物血液及臟器組織中分離中性粒細胞，在醫(yī)療和醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究中廣泛應(yīng)用,。
其他人及動物多種比重細胞分離液,。注：因不同種屬不同比重分離液的細胞離散系數(shù)及細胞帶電不同，所以用戶在定制分離液時應(yīng)提供所需分離液的比重,、動物的種屬及被分離細胞的名稱,。
一、 分離方法說明及圖例
A． 取1ml新鮮抗凝血,，與全血及組織稀釋液1:1 混勻后小心加于1份本分離液之液面上,；
或取 1ml 組織單細胞懸液（具體制備方法詳見二、組織單細胞懸液的制備）小心加于1份本分離液之液面上,；
B. 以500g（約1800轉(zhuǎn)/分）離心25分鐘(半徑15cm水平轉(zhuǎn)子),。
此時離心管中由上下細胞分為四層。*層,；為血漿層,。第二層；為環(huán)狀乳白色單個核細胞層,。第三層,；為略帶渾濁的分離液層（富集一定量的中性粒細胞）。第四層,；為紅細胞層,。棄去*層血漿層及第二層細胞，收集第三層分離液層和第四層紅細胞層,，放入含細胞洗滌液10ml的試管中,，充分混勻后，以500g（約1800轉(zhuǎn)/分）離心30分鐘,，沉淀經(jīng)1次洗滌后用紅細胞裂解液裂解紅細胞,，再經(jīng)3次洗滌去除紅細胞內(nèi)溶物和碎片后取沉淀細胞即為所需中性粒細胞。
注：A. 細胞提取率約 80%,。
B. 紅細胞裂解過程參考“紅細胞裂解液使用說明” ,。
二、組織單細胞懸液的制備
注：A.本說明只提供機械勻漿制備單細胞懸液的方法 本說明只提供機械勻漿制備單細胞懸液的方法,，酶消化法由于各實驗室選取的消化酶種類各不相同,，請各實驗室自行選擇進行試驗。
B. 全過程及所需試劑要求無菌環(huán)境 全過程及所需試劑要求無菌環(huán)境,。
剪碎法：將組織塊放入平皿后,，加入少量組織勻漿液及20%胎牛血清；用眼科剪將組織剪勻漿狀,，加入5ml組織勻漿液及20%胎牛血清,；用吸管吸取組織勻漿,，用100目不銹鋼濾網(wǎng)過濾到試管內(nèi)；離心沉淀1500轉(zhuǎn)/分×3 min,，再用細胞洗滌液清洗3次，每次以500rpm短時低速離心除去細胞碎片,，以200目不銹鋼濾網(wǎng)過濾去細胞團塊,。作細胞計數(shù)并調(diào)整細胞濃度為（2～5）×10 7 個/ml。常溫下放置, 待測細胞的活力,。分離前用20%胎牛血清或全血及組織稀釋液懸起細胞濃度為2×108-1×10 9 個/ml的單細胞懸液備用,。
勻漿器法：用眼科剪將組織剪成小塊；放入70ml組織研磨器內(nèi),，加入2ml組織勻漿液及20%胎牛血清,；緩慢轉(zhuǎn)動研棒，研磨勻漿,；用5ml組織勻漿液及20%胎牛血清沖洗研器,；收集細胞懸液，經(jīng)200目不銹鋼濾網(wǎng)過濾,；離心沉淀800rpm×2min ,，再用細胞洗滌液洗3次，離心沉淀,。作細胞計數(shù)并調(diào)整細胞濃度為（2～5）×10 7 個/ml,。常溫下放置, 待測細胞的活力。分離前用20%胎牛血清或全血及組織稀釋液懸起細胞濃度為2×10 8 -1×10 9 個/ml的單細胞懸液備用,。
細胞計數(shù)方法:
細胞計數(shù)法是用來計數(shù)細胞懸液中細胞數(shù)量的一種方法,。一般利用計數(shù)板（血球計數(shù)板）進行。既可用于分離（散）細胞培養(yǎng)接種前計數(shù)所制備的細胞懸液中的細胞數(shù)量,，也可用于對培養(yǎng)物的細胞數(shù)量進行計數(shù),。不論計數(shù)的對象如何，均須制備分散的細胞懸液,。
計數(shù)與計算過程
1）,、在細胞計數(shù)板中央放置計數(shù)的蓋玻片。
2）,、用玻璃虹吸管吸取細胞,，讓虹吸管在蓋玻片上或下側(cè)的計數(shù)板凹蹧處流出懸液，蓋玻片被液體充滿為止,。
3）,、置顯微鏡下計數(shù)四角大方格內(nèi)的細胞總數(shù)。對于壓線的細胞只計數(shù)在上線和左線者,，對于細胞團按單個細胞計數(shù),。
4）,、按下式計數(shù)細胞懸液的密度： 細胞密度＝（4個大格細胞總數(shù)/4）×10 4 個/ml×稀釋倍數(shù)公式中乘以10 4 因為計數(shù)板中每一個大格的體積為：
1.0mm（長）×1.0mm（寬）×0.1mm（高）＝0.1mm 3 而 1ml＝1000mm 3
細胞計數(shù)要點：
A． 進行細胞計數(shù)時，要求懸液中細胞數(shù)目不低于10 4 個/ml,，如果細胞數(shù)目很少要進行離心再懸浮于少量培養(yǎng)液中,；顯微鏡下計數(shù)時，遇到2個以上細胞組成的細胞團,，應(yīng)按單個細胞計算,。如果細胞團>10％，說明細胞分散不充分; 或細胞數(shù)<200個/10mm 2 或>500個/10 mm 2 時,，說明稀釋不當,，需重新制備細胞懸液。
B． 要求細胞懸液中的細胞分散良好,，否則影響計數(shù)準確性,。
C． 取樣計數(shù)前，應(yīng)充分混勻細胞懸液,，尤其是多次取樣計數(shù)時更要注意每次取樣都要混勻,，以求計數(shù)準確；
D． 數(shù)細胞的原則是只數(shù)完整的細胞,，若細胞聚集成團時,，只按照一個細胞計算。如果細胞壓在格線上時,，則只計上線,，不計下線，只計左線,，不計右線,。
E． 操作時，注意蓋玻片下不能有氣泡,，也不能讓懸液流入旁邊槽中,，否則要重新計數(shù)。
三,、 注意事項
A． 本分離液是敏光型的,，在運輸和貯藏過程中應(yīng)在18℃-25℃避光保存，啟封后置4℃保存避免微生物污染,。另外,，本品為真空包裝，未啟封前置于10℃ 以下易出現(xiàn)白色結(jié)晶,，影響分離效果,。
B． 待分離的樣本要求新鮮，避免冷凍和冷藏。分離液和所分離樣本一定在20℃水浴箱中復(fù)溫20 分鐘保證分離液和所分離樣本溫度在20℃±2℃時分離效果好,，且所有操作過程一定要在無菌條件下進行,。
C． 由于各品牌離心機的性能不同，國內(nèi)南北地區(qū)溫度環(huán)境和四季的差異,，可能影響分離效果,，用戶可以調(diào)節(jié)離心轉(zhuǎn)數(shù)，調(diào)節(jié)離心的時間,，摸索的分離條件（具體分離條件各實驗室自定）,。
D． 好使用無靜電反應(yīng)的離心管，推薦使用未經(jīng)過堿處理的玻璃離心管,。
E． 優(yōu)抗凝劑選擇：EDTA、枸櫞酸,、肝素,。應(yīng)注意在血液稀釋過程中應(yīng)去除抗凝劑體積 。
四,、產(chǎn)品性能指標
pH 7.0-7.5
滲透壓 280-340mOsmol/kg
內(nèi)毒素 ≤0.5EU/ml
無菌 直接接種培養(yǎng)14 天后培養(yǎng)基澄清
澄明度及不溶性顆粒物 每50ml 溶液中含10μm 以上的不溶性微粒20 粒以下,，
含25μm 以上的不溶性微粒5 粒以下
五、貯藏及保存期限
18℃-25℃避光保存,，有效期兩年,。啟封后置4℃保存，有效期一周,。
注：若保證無微生物污染,，啟封后可置4℃長期保存。但應(yīng)注意保存溫度較低時本分離液易
出現(xiàn)白色結(jié)晶,，影響分離效果,。
細胞培養(yǎng)試劑人或各種動物外周血及臟器組織中性粒細胞分離液訂購說明：
1、絕大部分產(chǎn)品備有現(xiàn)貨,，一般情況下都能訂貨當日發(fā)貨,。
2、部分非常用產(chǎn)品,，需提前1－2日預(yù)訂,，海外期貨則需要提前3-6周預(yù)訂。
3,、部分產(chǎn)品價格會因貨期,、批次等因素發(fā)生變化，若有變動以訂貨當日新價格為準,。
4,、每日訂單截止時間為16點整，部分城市可到17點整,，因超過截止時間造成當日不能發(fā)貨的將于次日安排發(fā)貨,。
5,、請辦理完貨款后，將收據(jù),、底單等連同收貨人的地址,、姓名、等以傳真,、,、短信、等形式通知我們,。
運輸說明：
1,、極低溫產(chǎn)品：極低溫產(chǎn)品運輸過程中加裝干冰運輸。用干冰把產(chǎn)品包裹起來,，再用泡沫盒密封,，膠帶層層粘住泡沫盒，放入索萊寶的箱子,，然后交付給合作快遞,，安全快速高效放心的送客戶的手中，保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一,，為您的實驗保駕護航,。
2、低溫產(chǎn)品：低溫產(chǎn)品運輸過程中加裝索萊寶冰袋運輸,。事先用冰袋把產(chǎn)品包裹起來,，再使用泡沫盒密封，用膠帶嚴實密封泡沫盒,，再放入索萊寶的箱子（保溫效果少可以持續(xù)一周）,，然后交付給合作快遞，安全快速高效放心的送客戶的手中,，保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一,，為您的實驗保駕護航。
3,、常溫產(chǎn)品：常溫產(chǎn)品運輸過程中無需加冰或者特殊包裝,。產(chǎn)品由公司庫房人員快速配貨，準確快速高效的快遞保證產(chǎn)品快速送達您的手中,。
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