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PCR試劑 Taq Plus DNA Polymerase
貨號:PC1200
規(guī)格:500U/1000U
濃度:5U/ul
保存:-20℃保存, 有效期少一年。
產品簡介:
Taq Plus DNA Ploymerase 是 Taq 酶和 Pfu 酶的混合物,,既有 5’→ 3’核酸外切酶活性,,又有 3’→5’核酸外切酶活性。Taq Plus DNA Ploymerase 兼具 Taq DNA Ploymerase 的高效率及 Pfu DNA Ploymerase 的高保真性的特點,。與 Taq 酶相比,,Taq Plus DNA Ploymerase 具有擴增長度增加(對模板有效擴增長度可達 10kb)、保真度好等優(yōu)點;與 Pfu 酶相比,,具有擴增速度快,、反應效率高的優(yōu)勢。常用于一些對保真度要求高和模板結構復雜(如GC 含量高,、有二級結構等)的 PCR 擴增,。其 PCR 產物可直接進行 TA 克隆,如需提高克隆效率,,建議先純化,,加 A 后再進行 TA 克隆。
活性定義:
1 單位(U) Taq plus DNA Polymerase 活力定義為在 74℃,,30 分鐘內,,以活性化的大馬哈魚精子 DNA 作為模板,將 10 nmol 脫氧核苷酸摻入到酸不溶物質所需的酶量,。
質量控制:
SDS-PAGE 檢測 Taq plus DNA Polymerase 純度大于 99%,;經檢測無外源核酸酶活性;PCR 方法檢測無宿主殘余 DNA,;能有效地擴增人類基因組中的單拷貝基因,;室溫存放一周,無明顯活性改變,。
酶貯存緩沖液:
20mM Tris-HCl (pH 8.0); 0.1 mM EDTA; 1 mM DTT; 100 mM KCl ; 50% glycerol,;其他成份。
適用范圍:
用于 DNA 的高保真擴增,,如基因表達克隆,、基因定點突變、細胞內基因點突變的分析(SNP) 和末端補平等,。
建議PCR體系(以 50μl反應體系為例)
Template <0.5μg
上游引物(10μM) 1μl
下游引物(10μM) 1μl
10×Buffer(含Mg 2+ ) 5μl
dNTP(各 2.5mM) 4μl
Taq plus DNA Polymerase 0.5-1μl
ddH2O up to 50μl
注意事項:
1,、PCR 反應體系加樣時,后一步加入 Taq Plus DNA Ploymerase,,整個過程宜在冰上操作,。
2、取 Taq DNA Ploymerase 做 PCR 反應時,,請用高壓滅菌處理過的吸頭,。
3、10×Taq Plus Buffer中含 15 mM Mg 2+ ,,如PCR反應需要較高Mg 2+ 濃度,,請另行加入。
4,、一般情況下,,Taq Plus DNA Ploymerase 可以很好地擴增 10kb 以下的片段。能否成功擴增更長的片段,主要
與模板的結構和引物的設計有關,,如果擴增長片段有困難,,好選用 Long Taq DNA Ploymerase。
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