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琥珀酸脫氫酶（SDH）活性檢測試劑盒

操作步驟：

一、樣本的前處理：組織,、細菌或細胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離：

1,、 稱取約0.1g 組織或收集500 萬細菌或細胞，加入1mL 試劑一和10uL 試劑三,，用冰浴勻漿器或研缽勻漿,。

2、 將勻漿600g,，4℃離心5min,。

3、 棄沉淀,，將上清液移另一離心管中,，11000g，4℃離心10min,。

4,、 上清液即胞漿提取物,，可用于測定從線粒體泄漏的SDH（此步可選做）,。

5、 在步驟④的沉淀中加入200uL 試劑二和2uL 試劑三,，超聲波破碎（冰浴,，功率20％或200W，超聲3 秒,，間隔10 秒,，重復(fù)30 次），用于線粒體SDH 活性測定,。

二,、測定步驟和加樣表

1、 分光光度計或酶標儀預(yù)熱30min 以上,，調(diào)節(jié)波長600nm,，蒸餾水調(diào)零。

2,、 樣本測定（1）在試劑四中加入18mL 蒸餾水充分溶解,，置于37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）水浴10min； 用不完的試劑4℃保存一周,；（2）在試劑五中加入1mL 蒸餾水,，充分溶解待用；用不完的試劑4℃保存一周,；（3）在微量石英比色皿或96 孔板中加入10μL 樣本,、10μL 試劑五和180μL 試劑四,，混勻，立即記錄600nm 處20s 時的吸光值A(chǔ)1 和 1min20s 后的吸光值A(chǔ)2,，計算ΔA=A1-A2,。

琥珀酸脫氫酶(SDH)活性檢測試劑盒

a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

（1） 按樣本蛋白濃度計算單位的定義：每mg 組織蛋白每分鐘消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個酶活性單位。 SDH 活性（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10 9]÷(Cpr×V 樣) ÷T=952×ΔA÷Cpr

（2） 按樣本鮮重計算單位的定義：每g 組織每分鐘消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個酶活性單位,。 SDH 活性（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10 9]÷(W× V 樣÷V 樣總) ÷T=192×ΔA÷W

（3） 按細菌或細胞密度計算單位的定義：每1 萬個細菌或細胞每分鐘消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個酶活性單位,。 SDH 活性（nmol/min/10 4 cell）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10 9]÷(500×V 樣÷V 樣總)÷T=0.385×ΔA V 反總：反應(yīng)體系總體積，2×10 -4 L,；ε：2,6-二氯吲哚酚摩爾消光系數(shù),，2.1×10 4 L / mol /cm；d：比色皿光徑,，1cm,；V 樣：加入樣本體積，0.01 mL,；V 樣總：加入提取液體積,，0.202 mL；T：反應(yīng)時間,，1 min,；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL,；W：樣本質(zhì)量,，g；500：細菌或細胞總數(shù),，500 萬,。

b. 用96 孔板測定的計算公式如下

（1） 按樣本蛋白濃度計算單位的定義：每mg 組織蛋白每分鐘消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個酶活性單位。 SDH 活性（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10 9]÷(V 樣×Cpr) ÷T=1904×ΔA÷Cpr

（2） 按樣本鮮重計算單位的定義：每g 組織每分鐘消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個酶活性單位,。 SDH 活性（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10 9]÷(W× V 樣÷V 樣總)÷T=384×ΔA÷W

（3） 按細菌或細胞密度計算單位的定義：每1 萬個細菌或細胞每分鐘消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個酶活性單位,。 SDH 活性（nmol/min/10 4 cell）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10 9]÷(500×V 樣÷V 樣總)÷T=0.77×ΔA V 反總：反應(yīng)體系總體積，2×10 -4 L,；ε：2,6-二氯吲哚酚摩爾消光系數(shù),，2.1×10 4 L / mol /cm；d： 96 孔板光徑,，0.5cm,；V 樣：加入樣本體積，0.01 mL,；V 樣總：加入提取液體積,，0.202mL；T：反應(yīng)時間,，1 min,；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度,，mg/mL；W：樣本質(zhì)量,，g,；500：細菌或細胞總數(shù)，500 萬,。

試劑一：100mL×1 瓶,，-20℃保存；試劑二：20mL×1 瓶,，-20℃保存,；試劑三：1.5mL×1 支，-20℃保存,；試劑四：粉劑×1 瓶,，4℃保存；試劑五：粉劑×1 支,，-20℃保存,；

相關(guān)文獻： 

《Cell death induced by α-terthienyl via reactive oxygen species-mediated mitochondrial dysfunction and oxidative stress in the midgut of Aedes aegypti larvae》 作者:JieZhangaShakilAhmadaLan-YingWangaQianHanbJian-ChunZhangaYan-PingLuo 期刊:Free Radical Biology and Medicine 影響因子:5.657 PMID:31022448