目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化指標檢測試劑盒>> BC0730丙酮酸羧化酶（PC）檢測試劑盒
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50管/48樣 |
|---|---|---|---|
| 貨號 | BC0730 | 應用領域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),石油 |
| 主要用途 | 丙酮酸羧化酶（PC）檢測 |
丙酮酸羧化酶（PC）檢測試劑盒
操作步驟：
一、 樣本的前處理組織,、細菌或細胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離： 1,、 稱取約0.1g 組織或收集500 萬細菌或細胞，加入1mL 提取液,，用冰浴勻漿器或研缽勻漿,。 2,、 將勻漿600g,，4℃離心5min。 3,、 棄沉淀,，將上清液移另一離心管中,，11000g，4℃離心10min,。 4,、 上清液即胞漿提取物，可用于測定從線粒體泄漏的PC（此步可選做）,。 5,、 在步驟④的沉淀中加入1mL 提取液，超聲波破碎（冰浴,，功率20％或200W,，超聲3秒，間隔10 秒,，重復30 次）,，用于線粒體PC 活性測定。
二,、測定步驟 1,、 分光光度計預熱30min 以上，調節(jié)波長340nm,，蒸餾水調零,。
2、 工作液的配制：臨用前將試劑二和試劑三轉移到試劑一中混合溶解待用,；置于37℃(哺乳動物) 或25℃(其它物種)預熱5 分鐘,；用不完的試劑4℃保存一周；試劑四的配制：在試劑四瓶中加入2.5mL 蒸餾水充分溶解待用,；用不完的試劑4℃保存一周,；
3、 在1mL 石英比色皿中加入50μL 樣本,、50μL 試劑四和900μL 工作液,，立即混勻，記錄340nm 處初始吸光值A1 和 2min 后的吸光值A2,，計算A=A1-A2,。注意：在該試劑盒中，若ΔA 大于0.5,，需將樣本用提取液稀釋適當倍數(shù)后測定,，使ΔA 小于0.5 可提高檢測靈敏度。計算公式中乘以相應稀釋倍數(shù),。
丙酮酸羧化酶（PC）檢測試劑盒
PC 活性計算：（1） 按樣本蛋白濃度計算單位定義：每mg 組織蛋白每分鐘消耗1nmol NADH 定義為一個酶活力單位,。 PC（U/mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10 9]÷(V 樣×Cpr) ÷T=1608×ΔA÷Cpr （2） 按樣本鮮重計算單位定義：每g組織每分鐘消耗1 nmol NADH 定義為一個酶活力單位。 PC（U/g 鮮重）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10 9]÷(W ×V 樣÷V 樣總)÷T=1608×ΔA÷W （3） 按細菌或細胞密度計算：單位定義：每1 萬個細菌或細胞每分鐘消耗1 nmol NADH 定義為一個酶活力單位,。 PC（U/10 4 cell）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10 9]÷(500×V 樣÷V 樣總)÷T=3.215×ΔA V 反總：反應體系總體積,，1×10 -3 L,；ε：NADH 摩爾消光系數(shù)，6.22×10 3 L / mol /cm,；d：比色皿光徑,，1cm；V 樣：加入樣本體積,，0.05 mL,；V 樣總：加入提取液體積，1 mL,；T：反應時間,，2 min； Cpr：樣本蛋白質濃度,，mg/mL,；W：樣本質量，g,；500：細菌或細胞總數(shù),，500 萬。
PC 活性計算：（1） 按樣本蛋白濃度計算單位定義：每mg 組織蛋白每分鐘消耗1nmol NADH 定義為一個酶活力單位,。 PC（U/mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10 9]÷(V 樣×Cpr) ÷T=1608×ΔA÷Cpr （2） 按樣本鮮重計算單位定義：每g組織每分鐘消耗1 nmol NADH 定義為一個酶活力單位,。 PC（U/g 鮮重）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10 9]÷(W ×V 樣÷V 樣總)÷T=1608×ΔA÷W （3） 按細菌或細胞密度計算：單位定義：每1 萬個細菌或細胞每分鐘消耗1 nmol NADH 定義為一個酶活力單位。 PC（U/10 4 cell）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10 9]÷(500×V 樣÷V 樣總)÷T=3.215×ΔA V 反總：反應體系總體積,，1×10 -3 L,；ε：NADH 摩爾消光系數(shù)，6.22×10 3 L / mol /cm,；d：比色皿光徑,，1cm；V 樣：加入樣本體積,，0.05 mL,；V 樣總：加入提取液體積，1 mL,；T：反應時間,，2 min； Cpr：樣本蛋白質濃度,，mg/mL,；W：樣本質量，g,；500：細菌或細胞總數(shù),，500 萬。
相關文獻：
《Inhibition of?α?ketoglutarate dehydrogenase activity afects adventitious root growth in?poplar via?changes in?GABA shunt》 作者:Jianyun?Yue,Changjian?Du,Jing?Ji,Tiantian?Xie, Wei?Chen,Ermei?Chang, Lanzhen?Chen, Zeping?Jiang,Shengqing?Shi
期刊:Planta 影響因子:3.06 PMID:
《lncRNA Ftx promotes aerobic glycolysis and tumor progression through the PPARγ pathway in hepatocellular carcinoma》 作者:Xiao Li, Qi Zhao, Jianni Qi, Wenwen Wang ,Di Zhang ,Zhen Li, Chengyong Qin 期刊:International Journal of Oncology 影響因子:3.571 PMID:29845188
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