線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅳ活性檢測試劑盒

產(chǎn)品英文名:  Mitochondrial Respiratory Chain ComplexⅣActivity Assay Kit

產(chǎn)品貨號：BC0940                產(chǎn)地：北京市通州區(qū)馬駒橋聯(lián)東U谷8三樓

產(chǎn)品規(guī)格：50管/48樣           產(chǎn)品商標(biāo)：solarbio
保存與運(yùn)輸：4℃保存或-20℃保存,；            參考價格：1900
庫存狀態(tài)：現(xiàn)貨                          
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簡要介紹：
線粒體復(fù)合體Ⅳ又稱細(xì)胞色素C 氧化酶,，也是線粒體呼吸電子傳遞鏈主路和支路的共有成分，負(fù)責(zé)催化還原型細(xì)胞色素C 的氧化,，并終把電子傳遞給氧,，生成水。
    還原型細(xì)胞色素C 在550nm 有特征光吸收,，線粒體復(fù)合體Ⅳ催化還原型細(xì)胞色素C 生成氧化型細(xì)胞色素C,，因此550nm 光吸收下降速率能夠反映線粒體復(fù)合體Ⅳ酶活性。

產(chǎn)品詳細(xì)描述
產(chǎn)品內(nèi)容：
提取液：液體80mL×1 瓶,，4℃保存,；
試劑一：液體21mL×2瓶，4℃保存,；
試劑二：粉劑×2支,，-20℃保存；
試劑三：粉劑×2支,，4℃保存,；
工作液的配制：臨用前取試劑一、試劑二,、試劑三各一支,，將試劑二和試劑三依次轉(zhuǎn)移到試劑一中混合溶解。
 
產(chǎn)品說明：
線粒體復(fù)合體Ⅳ又稱細(xì)胞色素C氧化酶,，也是線粒體呼吸電子傳遞鏈主路和支路的共有成分,，負(fù)責(zé)催化還原型細(xì)胞色素C的氧化，并終把電子傳遞給氧生成水,。還原型細(xì)胞色素C在550nm有特征光吸收,，線粒體復(fù)合體Ⅳ催化還原型細(xì)胞色素C 生成氧化型細(xì)胞色素C，因此550nm光吸收下降速率能夠反映線粒體復(fù)合體Ⅳ酶活性,。
試驗中所需的儀器和試劑：
可見分光光度計,、臺式離心機(jī)、水浴鍋,、可調(diào)式移液器,、1mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器,、冰和蒸餾水,。

操作步驟：
一、復(fù)合體Ⅳ的提?。?/span>   

• 稱取約0.1g組織或收集500萬細(xì)胞,，加入1.0 mL提取液，用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
• 4 ℃ 600 g離心10min,。
• 將上清液移另一離心管中,，4 ℃ 11000 g離心15min。
• 上清液即胞漿提取物,，可用于測定從線粒體泄漏的復(fù)合體Ⅳ（此步可選做,，可以判斷線粒體提取效果）。
• 在沉淀中加入400uL提取液,，超聲波破碎（功率20％,，超聲5秒，間隔10秒,，重復(fù)15次）,，用于復(fù)合體Ⅳ酶活性測定，并且用于蛋白含量測定,。

二,、測定步驟：

1. 可見分光光度計預(yù)熱30min 以上，調(diào)節(jié)波長550nm,，蒸餾水調(diào)零,。
2. 樣本測定
3. 將工作液置于37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）孵育15min；用不完的試劑4℃可保存一周,；
4. 在1mL玻璃比色皿中分別加入

立即混勻,，分別記錄測定管和空白管550nm處初始吸光值A(chǔ)1和1min后的吸光值A(chǔ)2，測定管的記為A1測定管,，A2測定管,，空白管的記為A1空白管，A2空白管,。計算ΔA1=A1測定管-A2測定管,，ΔA2=A1空白管-A2空白管，ΔA=ΔA1-ΔA2,。
三,、復(fù)合體Ⅳ活力單位的計算：
單位定義：每mg組織蛋白每分鐘催化降解1nmol還原型細(xì)胞色素C定義為一個酶活力單位。
復(fù)合體Ⅳ活力(U/mg prot)=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10⁹]÷(V 樣×Cpr) ÷T=1099×ΔA÷Cpr
V 反總：反應(yīng)體系總體積,，8.4×10^-4 L,；ε：細(xì)胞色素C摩爾消光系數(shù)，1.91×10⁴ L / mol /cm,；d：比色皿光徑,，1cm；V 樣：加入樣本體積,，0.04 mL； T：反應(yīng)時間，1 min,；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度,，mg/mL，需自行測定,，建議使用本公司BCA蛋白濃度測定試劑盒,。
注意事項：

1. 為保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性，需先取1-2個樣做預(yù)實驗,，如果測定的吸光值過高（高于1）,，可用蒸餾水稀釋上清液后再測定。計算結(jié)果時注意乘以稀釋倍數(shù),。若ΔA大于0.4,，需將樣本稀釋適當(dāng)倍數(shù)（計算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)），使A1-A2 小于0.2,，可提高檢測靈敏度,；若ΔA偏小，則可以通過增加加入的樣品體積來提高靈敏度,。
2. 由于提取液中含有蛋白,，所以在測定樣品蛋白濃度時需要減去提取液本身的蛋白含量（單獨測量）。
3. 本試劑盒試劑足夠完成50管反應(yīng),。
4. 附：使用樣本重量計算公式：（檢測樣本數(shù)為50T/24S）

A,、上清中復(fù)合體Ⅳ活力的計算：
按樣本鮮重計算：
單位定義：每g組織在反應(yīng)體系中每分鐘催化降解1nmol還原型細(xì)胞色素C定義為一個酶活力單位。
復(fù)合體Ⅳ活力(U/g)=[ΔA1×V 反總÷（ε×d）×10⁹]÷(W÷V提取×V樣)÷T=1099×ΔA1÷W
ΔA1：上清測定值,；V 反總：反應(yīng)體系總體積,，8.4×10^-4 L；ε：細(xì)胞色素C摩爾消光系數(shù),，1.91×10⁴ L / mol /cm,；d：比色皿光徑，1cm,；V 樣：加入樣本體積,，0.04 mL；V提?。杭尤胩崛∫后w積,，1.0mL。 w：樣本重量,，g,。T：反應(yīng)時間，1 min,；
B,、沉淀中復(fù)合體Ⅳ活力的計算：
按樣本鮮重計算：
單位定義：每g組織在反應(yīng)體系中每分鐘催化降解1nmol還原型細(xì)胞色素C定義為一個酶活力單位,。
復(fù)合體Ⅳ活力(U/g)=[ΔA2×V 反總÷（ε×d）×10⁹]÷(W÷V提取×V樣)÷T=440×ΔA2÷W
ΔA2：沉淀測定值；V 反總：反應(yīng)體系總體積,，8.4×10^-4 L,；ε：細(xì)胞色素C摩爾消光系數(shù)，1.91×10⁴ L / mol /cm,；d：比色皿光徑,，1cm；V 樣：加入樣本體積,，0.04 mL,；V提取：加入提取液體積,，0.4mL,。 w：樣本重量，g,。T：反應(yīng)時間,，1 min；
C,、樣本復(fù)合體Ⅳ總活力的計算：
樣本復(fù)合體Ⅳ總活力即為上清中復(fù)合體Ⅳ活力與沉淀中復(fù)合體Ⅳ活力之和,。
按樣本鮮重計算：
復(fù)合體Ⅳ（U/g）=1099×ΔA1÷W+440×ΔA2÷W

相關(guān)文獻(xiàn)：
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