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本公司生產(chǎn)的*0感受態(tài)細(xì)胞是采用大腸桿菌*0菌株經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細(xì)胞,，可用于DNA的化學(xué)轉(zhuǎn)化,。使用pUC19質(zhì)粒檢測，轉(zhuǎn)化效率可達(dá)10⁸,，-70℃保存六個月轉(zhuǎn)化效率不發(fā)生改變,。

基因型：F_ mcrAΔ(mrr-hsd RMS-mcrBC) φ80 lacZΔM15△lacⅩ74 recA1 deoR araD139Δ(ara-leu)7697 galU galK rpsL (StrR) endA1 nupG

*0感受態(tài)細(xì)胞特 點：一種用于鋪制與培養(yǎng)質(zhì)粒平板和粘粒平板的重級缺陷的抑制型菌株。其中φ80 lacZΔM15基因的產(chǎn)物可與pUC載體編碼的β-半乳糖苷酶氨基端實現(xiàn)α-互補,，可用于藍(lán)白斑篩選,。該菌株適用于高效的DNA克隆和質(zhì)粒擴增，能保證高拷貝質(zhì)粒的穩(wěn)定遺傳,。

操作方法：（以下各步驟均為無菌操作）

1,，將感受態(tài)細(xì)胞置于冰上融化，以下實驗以100ul感受態(tài)細(xì)胞為例,。

2、向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入需轉(zhuǎn)化的目的DNA,，注意目的DNA的體積不要超過感受態(tài)細(xì)胞懸液體積的十分之一,，輕輕旋轉(zhuǎn)離心管以混勻內(nèi)容物，冰浴放置30分鐘,。

3,、將離心管置于42℃水浴中60-90秒，然后快速轉(zhuǎn)移到冰浴中放置2-3分鐘,，注意不要搖動離心管,。

4、向離心管中加入500ul無菌無抗的SOC或LB培養(yǎng)基,，37℃ 180rpm振蕩培養(yǎng)1小時,。目的是使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標(biāo)記基因表達(dá)，使菌體復(fù)蘇,。

5,、取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞涂布含相應(yīng)抗生素的SOC或LB平板，37℃倒置培養(yǎng)12-16小時,。涂布用量可根據(jù)具體實驗來調(diào)整,，如轉(zhuǎn)化的DNA總量較多，可取100ul左右的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂板,；反之,，如轉(zhuǎn)化的DNA總量較少，可取200-300ul的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂板。過多菌液可以抑制細(xì)菌生長,。如果預(yù)計的克隆較少,，可通過離心后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于一個平板中,。涂布剩余的菌液可4℃保存,，如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過少可以將剩下的菌液再涂布新的平板。

注意事項：

1,、感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)保存在-70℃,，不可反復(fù)凍融，否則其轉(zhuǎn)化效率將會降低,。

2,、實驗過程中應(yīng)嚴(yán)格無菌操作，防止其它DNA或雜菌的污染,，避免為以后的篩選,、鑒定帶來影響。

3,、轉(zhuǎn)化時,，轉(zhuǎn)化效率與外源DNA的濃度在一定范圍內(nèi)成正比，但當(dāng)加入的外源DNA量過多或體積過大反而會降低轉(zhuǎn)化效率,。轉(zhuǎn)化時DNA體積要小于感受態(tài)細(xì)胞體積的十分之一,。

4、轉(zhuǎn)化率的計算：轉(zhuǎn)化率＝產(chǎn)生菌落的總數(shù)/鋪板DNA總量,。

5,、為防止轉(zhuǎn)化實驗不成功，可以保留部分連接產(chǎn)物,，以重新轉(zhuǎn)化,，將損失降到低。