目錄:北京索萊寶科技有限公司>>基因工程>>PCR>> D2810 DNA退火緩沖液
| 參考價(jià) | 面議 |
| 參考價(jià) | 面議 |
更新時(shí)間：2024-08-20 10:01:33瀏覽次數(shù)：2158評(píng)價(jià)
聯(lián)系我們時(shí)請(qǐng)說明是化工儀器網(wǎng)上看到的信息,，謝謝!
把要退火的DNA oligo用經(jīng)滅菌的三蒸水配制成50μM,。解凍Annealing Buffer for DNA Oligos(5X)，混勻備用,。如經(jīng)常使用,，本Buffer可放置2-8℃一個(gè)月。
2. 如下設(shè)置退火反應(yīng)體系：
| Annealing Buffer for DNA Oligos(5X) | 20μl |
| DNA oligo A(50μM) | 20μl |
| DNA oligo B(50μM) | 20μl |
| Nuclease-Free Water | 40μl |
| 總體積 | 100μl |
按照上述順序依次加入各種試劑,，混勻,。放入PCR儀。
3. 如下設(shè)置PCR儀進(jìn)行退火反應(yīng)：
| 步驟 | 溫度 | 時(shí)間 | 說明 |
| 1 | 95℃ | 2分鐘 | 讓oligo充分變性 |
| 2 | 每8秒下降0.1℃,，降25℃(注1) | 約90分鐘 | 退火 |
| 3 | 4℃ | 長時(shí)間保持 | 暫時(shí)存放 |
注1：如果所用的PCR儀不具備下降0.1℃的功能,，也可以設(shè)置為每90秒下降1℃。
4. 退火結(jié)束后可以直接用于連接反應(yīng),，也可以在-20℃凍存?zhèn)溆?。如果退火結(jié)束后打算進(jìn)行酶切等其它反應(yīng)，好用純化試劑盒進(jìn)行純化,，或者確保退火產(chǎn)物在反應(yīng)體系中體積不超過10%,，以避免AnnealingBuffer對(duì)后續(xù)的酶反應(yīng)體系的干擾。
(空格分隔,最多3個(gè),單個(gè)標(biāo)簽最多10個(gè)字符)
會(huì)員.png)
12
化工儀器網(wǎng)