線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ活性檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品英文名:Micro Mitochondrial Respiratory Chain ComplexⅠActivity Assay Kit

產(chǎn)品貨號(hào)：BC0515                產(chǎn)地：北京市通州區(qū)馬駒橋聯(lián)東U谷8三樓

產(chǎn)品規(guī)格：100管/96樣            產(chǎn)品商標(biāo)：solarbio
保存與運(yùn)輸：4℃保存或-20℃保存；            參考價(jià)格：2800
庫存狀態(tài)：現(xiàn)貨                          
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簡(jiǎn)要介紹：
復(fù)合體Ⅰ（EC 1.6.5. 3）又稱 NADH-CoQ 還原酶或 NADH 脫氫酶,，廣泛存在于動(dòng)物,、植物、 微生物和培養(yǎng)細(xì)胞的線粒體中,，是線粒體內(nèi)膜中大的蛋白復(fù)合物,。該酶催化一對(duì)電子從 NADH 傳遞給 CoQ，同時(shí)可使O2還原生成 O2.-,，是呼吸電子傳遞鏈上產(chǎn)生O2.-的主要部位,。 測(cè)定該酶活性，不僅可以反映呼吸電子傳遞鏈（ETC）狀態(tài),，而且可以反映活性氧（ROS） 生成狀態(tài),。

產(chǎn)品詳細(xì)描述
產(chǎn)品內(nèi)容：
提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存,；  
試劑一：液體20 mL×1瓶,，4℃保存；
試劑二：粉劑×1支,，4℃保存,；臨用前加入1mL丙tong。
試劑三：粉劑×1 支,，-20℃保存,；溶于1mL丙tong，可分裝后-20℃保存,。臨用前再用丙tong100倍稀釋后使用,，現(xiàn)用現(xiàn)配。
試劑四：粉劑×1支,，-20℃保存,；臨用前加入2mL蒸餾水，現(xiàn)配現(xiàn)用,；   
工作液的配制：臨用前將試劑二和試劑三1:1混合,，現(xiàn)配現(xiàn)用,。
產(chǎn)品說明：
復(fù)合體Ⅰ（EC 1.6.5. 3）又稱NADH-CoQ 還原酶或NADH脫氫酶，廣泛存在于動(dòng)物,、植物,、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞的線粒體中，是線粒體內(nèi)膜中大的蛋白復(fù)合物,。該酶催化一對(duì)電子從NADH傳遞給CoQ,，同時(shí)可使O₂還原生成O^2-,，是呼吸電子傳遞鏈上產(chǎn)生O^2.-的主要部位,。測(cè)定該酶活性，不僅可以反映呼吸電子傳遞鏈（ETC）狀態(tài),，而且可以反映活性氧（ROS）生成狀態(tài),。
復(fù)合體Ⅰ能夠催化NADH脫氫生成NAD⁺，在340nm下測(cè)定NADH的氧化速率計(jì)算出該酶活性的大小,。
試驗(yàn)中所需的儀器和試劑：
紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀,、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋,、可調(diào)式移液器,、微量石英比色皿/石英96孔板 、研缽/勻漿器,、丙tong,、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一,、復(fù)合體的提?。?/span> 

1. 稱取約0.1g組織或收集500萬細(xì)胞，加入1.0 mL提取液,，用勻漿器或研缽于冰上勻漿,。
2. 4 ℃ 600 g離心10min。
3. 將上清液移另一離心管中,，4 ℃ 11000 g離心15min,。
4. 上清液即胞漿提取物，可用于測(cè)定從線粒體泄漏的復(fù)合體Ⅰ（此步可選做,，可以判斷線粒體提取效果）,。
5. 在沉淀中加入400μL提取液，超聲波破碎（功率20％,，超聲5秒,，間隔10秒，重復(fù)15次）,，用于復(fù)合體Ⅰ酶活性測(cè)定,，并且用于蛋白含量測(cè)定,。

二、測(cè)定步驟：

1. 紫外分光光度計(jì)預(yù)熱30min 以上,，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)340nm,，蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑一37℃（哺乳動(dòng)物）或25℃（其他物種）預(yù)熱15min,。
3. 操作表：在微量石英比色皿/石英96孔板中分別加入

三,、復(fù)合體Ⅰ活力單位的計(jì)算：  
（1）以微量石英比色皿計(jì)算：
單位定義：每mg 組織蛋白每分鐘消耗1 nmol 的NADH 定義為一個(gè)酶活力單位。
復(fù)合體Ⅰ活力（U/mg prot）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10⁹]÷(V 樣×Cpr) ÷T =1608×ΔA÷Cpr
V 反總：反應(yīng)體系總體積,，2×10^-4 L,；ε：NADH 摩爾消光系數(shù)，6.22×10³ L / mol /cm,；d：比色皿光徑,，1cm；V 樣：加入樣本體積,，0.01 mL,； T：反應(yīng)時(shí)間，2min,；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度,，mg/mL。
（2）以96孔板計(jì)算：將上述公式中的d-1cm改為d-0.6cm進(jìn)行計(jì)算即可,。
注意事項(xiàng)：

1. 為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,，需先取1-2個(gè)樣做預(yù)實(shí)驗(yàn)，如果測(cè)定的吸光值過高（高于1.5）,，可用蒸餾水稀釋上清液后再測(cè)定,。計(jì)算結(jié)果時(shí)注意乘以稀釋倍數(shù)。若ΔA大于0.4,，需將樣本稀釋適當(dāng)倍數(shù)（計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)）,；若ΔA偏小，則可以通過增加加入的樣品體積來提高靈敏度,。
2. 樣品蛋白濃度需自行測(cè)定,，推薦我公司BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒。由于提取液中含有蛋白,，所以在測(cè)定樣品蛋白濃度時(shí)需要減去提取液本身的蛋白含量,。
3. 推薦使用樣本蛋白濃度計(jì)算酶活,，若用樣本鮮重計(jì)算，則需加測(cè)胞漿提取物酶活,，上清和沉淀酶活之和方為總酶活,。
4. 本試劑盒試劑足夠完成25管反應(yīng)。
5. 附:使用樣本重量計(jì)算公式：（樣本檢測(cè)數(shù)為25T/12S）

A,、上清中復(fù)合體I活力的計(jì)算:
按樣本鮮重計(jì)算：
單位的定義：每g組織在反應(yīng)體系中每分鐘消耗1 nmol NADH定義為一個(gè)酶活力單位,。
復(fù)合體I活性（U/g）= [ΔA1×V 反總÷（ε×d）×10⁹]÷(W÷V提取×V樣)÷T
                   =1608×ΔA1÷W。
ΔA1：上清測(cè)定值,；V 反總：反應(yīng)體系總體積,，10^-3 L；ε：NADH 摩爾消光系數(shù),，6.22×10³ L / mol /cm,；d：比色皿光徑,，1cm,；V提取：加入提取液體積,，1mL ,；V 樣：加入樣本體積，0.05mL,；T：反應(yīng)時(shí)間,，2 min；W：樣本重量,，g,。
B、沉淀中復(fù)合體I活力的計(jì)算:
按樣本鮮重計(jì)算：
單位的定義：每g組織在反應(yīng)體系中每分鐘消耗1 nmol NADH定義為一個(gè)酶活力單位,。
復(fù)合體I活性（U/g）= [ΔA2×V 反總÷（ε×d）×10⁹]÷(W÷V提取×V樣本)）÷T
                   =643×ΔA2÷W,。
ΔA2：沉淀測(cè)定值；V 反總：反應(yīng)體系總體積,，10^-3 L,；ε：NADH 摩爾消光系數(shù)，6.22×10³ L / mol /cm d：比色皿光徑,，1cm,；V提取：沉淀重懸體積,，0.4mL ,；V 樣：加入樣本體積，0.05mL,；T：反應(yīng)時(shí)間,，2 min,；W：樣本重量，g,。
C,、樣本復(fù)合體I總活力的計(jì)算:
樣本復(fù)合體I總活力即為上清中復(fù)合體I活力與沉淀中復(fù)合體I活力之和。
按樣本鮮重計(jì)算：
復(fù)合體I（U/g 鮮重）=1608×ΔA1÷W +643×ΔA2÷W,。

相關(guān)文獻(xiàn)：
《GSK3β-mediated tau hyperphosphorylation triggers diabetic retinal neurodegeneration by disrupting synaptic and mitochondrial functions》 作者:Huazhang Zhu, Weizhen Zhang, Yingying Zhao, Xingsheng Shu, Wencong Wang, Dandan Wang, Yangfan Yang, Zhijun He, Xiaomei Wang & Ying Ying  期刊:Molecular Neurodegeneration 影響因子:8.274 PMID:30466464
《Weanling Offspring of Dams Maintained on Serine-Deficient Diet Are Vulnerable to Oxidative Stress》 作者:Liuqin He, Haiwen Zhang, and Xihong Zhou 期刊:Oxidative Medicine and Cellular Longevity 影響因子:4.868 PMID:30305866
《A Damaged Oxidative Phosphorylation Mechanism Is Involved in the Antifungal Activity of Citral against Penicillium digitatum》 作者:Qiuli OuYang, Nengguo Tao* and Miaoling Zhang 期刊:Frontier in Immunology 影響因子:4.259 PMID:29503638
《Inhibition of the mitochondrial complex-1 protects against carbon tetrachloride-induced acute liver injury》 作者:Hu Hua,Zhenglei Zhang,Yun Qian,Hui Yuan,Wenwen Ge,Songming Huang,Aihua Zhang,Yue Zhang,Zhanjun Jia,Guixia Ding 期刊:Biomed. Pharmacother. 影響因子:3.743 PMID:31078037
《Growth Hormone Receptor Gene is Essential for Chicken Mitochondrial Function In Vivo and In Vitro》 作者:Bowen Hu , Shuang Hu , Minmin Yang , Zhiying Liao , Dexiang Zhang , Qingbin Luo , Xiquan Zhang and Hongmei Li 期刊:Int J Mol Sci. 影響因子:4.183 PMID:30935132

 

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