產(chǎn)品名稱：NADP蘋果酸酶(NADP-ME)活性檢測試劑盒

產(chǎn)品英文名： NADP Malic Enzyme(NADP-ME) Assay Kit

產(chǎn)品貨號：BC1120         產(chǎn)地：北京市通州區(qū)馬駒橋聯(lián)東U谷8三樓

產(chǎn)品規(guī)格：50管/48樣         產(chǎn)品商標：solarbio
保存與運輸：4℃保存或-20℃保存,；            參考價格：420
庫存狀態(tài)：現(xiàn)貨                          
關(guān)鍵字：NADP蘋果酸酶試劑盒|活性檢測試劑盒|NADP-ME活性檢測|試劑盒

簡要介紹：
ME 廣泛存在于微生物、培養(yǎng)細胞,、動物和植物胞漿中,，尤其在植物組織中活性較高。ME 催 化蘋果酸氧化脫羧的可逆反應(yīng),，產(chǎn)生丙tong酸和 CO2,，以及伴隨 NAD(P)+的還原反應(yīng)，是蘋果酸代謝 的關(guān)鍵酶,。ME 活性與生物合成和抗氧化密切相關(guān),。近年來植物 ME 活性測定較多，已經(jīng)成為抗氧 化研究的熱點,。根據(jù)輔酶專一性和對底物特異性的不同,，可將 ME 分為 NAD-ME(EC1.1.1.38)和 NADP-ME(EC1.1.1.40)。 NADP-ME 催化 NADP+還原成 NADPH,，在 340nm 下測定 NADPH 增加速率,。

產(chǎn)品詳細描述
產(chǎn)品內(nèi)容：
提取液：液體 70mL×1 瓶，4℃保存,；
試劑一：液體 40mL×1 瓶,，4℃保存；
試劑二：粉劑×1 瓶,，4℃保存,；臨用前加入 20mL 提取液充分溶解備用；
試劑三：粉劑×2 支,，4℃保存,；用時每支加 1mL 雙蒸水充分溶解備用；
試劑四：粉劑×2 支,，-20℃保存,；用時每支加 500μL 雙蒸水充分溶解備用。
工作液：在 15mL 試劑二中加入 2mL 試劑三和 1mL 試劑四，可以根據(jù)比例現(xiàn)用現(xiàn)配,。 產(chǎn)品說明：
ME 廣泛存在于微生物,、培養(yǎng)細胞、動物和植物胞漿中,，尤其在植物組織中活性較高,。ME 催 化蘋果酸氧化脫羧的可逆反應(yīng)，產(chǎn)生丙tong酸和 CO2,，以及伴隨 NAD(P)+的還原反應(yīng),，是蘋果酸代謝 的關(guān)鍵酶。ME 活性與生物合成和抗氧化密切相關(guān),。近年來植物 ME 活性測定較多,，已經(jīng)成為抗氧 化研究的熱點。根據(jù)輔酶專一性和對底物特異性的不同,，可將 ME 分為 NAD-ME(EC1.1.1.38)和 NADP-ME(EC1.1.1.40),。 NADP-ME 催化 NADP+還原成 NADPH，在 340nm 下測定 NADPH 增加速率,。 
試驗中所需的儀器和試劑： 紫外分光光度計,、低溫離心機、水浴鍋,、可調(diào)節(jié)移液器,、1mL 石英比色皿、勻漿器和蒸餾水 

操作步驟： 

• 粗酶液提?。?

細菌、細胞或組織樣品的制備： 細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內(nèi),，棄上清,，按照每 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取 液，超聲波破碎細菌或細胞（功率 20％,，超聲 3s,，間隔 10s，重復(fù) 30 次）,。8000g 4℃離心 10min,， 取上清，置冰上待測,。
組織：稱取約 0.1g 組織,，加入 1mL 提取液進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min,，取上清,，置 冰上待測。 血清（漿）樣品：直接檢測。

• 測定步驟：
• 紫外分光光度計預(yù)熱 30min 以上,，調(diào)節(jié)波長 340nm,，蒸餾水調(diào)零。
• 將試劑一在 37℃（哺乳動物）或 25℃（其它物種）中保溫 15min 左右,。
• 操作表：

將上述試劑按順序加入 1 mL 石英比色皿中,，混勻后在 37℃（哺乳動物）或 25℃（其它物種）， 340 nm 波長下記錄初始吸光度 A1 和反應(yīng) 1min 后的吸光度 A2,，計算ΔA=A2-A1,。

注意事項：

1. 若 A2-A1 大于 0.5，需將酶液用提取液稀釋,，使 A2-A1 小于 0.5,，可提高檢測靈敏度。
2. 實驗時,，試劑三,、試劑四和樣本在冰上放置，以免變性和失活,。試劑一 37℃或 25℃水浴放置,。
3. 比色皿中反應(yīng)液的溫度必須保持 37℃或 25℃，取小燒杯一只裝入一定量的 37℃或 25℃蒸餾水,， 將此燒杯放入 37℃或 25℃水浴鍋中,。在反應(yīng)過程中把比色皿連同反應(yīng)液放在此燒杯中。
4. 兩個人同時做此實驗,，一個人比色,，一個人計時，以保證實驗結(jié)果的準確性,。
5. 如果ΔA＜0.01,，可將反應(yīng)時間延長到 5 分鐘或 10 分鐘。

• NADP-ME 活性計算：
• 組織中 NADP-ME 活力的計算：
• 按樣本蛋白濃度計算：

單位的定義：每 mg 組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘生成 1 nmol NADPH 定義為一個酶活力單位,。
NADP-ME（U/mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10 9]÷(Cpr×V 樣) ÷T=4823×ΔA÷Cpr

1. 按樣本鮮重計算：

單位的定義：每 g 組織在反應(yīng)體系中每分鐘生成 1 nmol NADPH 定義為一個酶活力單位,。
NADP-ME（U/g 鮮重）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10 9]÷(V 樣÷V 樣總×W) ÷T =4823×ΔA÷W

1. 細菌或細胞中 NADP-ME 活力的計算：
2. 按樣本蛋白濃度計算：

單位的定義：每 mg 組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘生成 1 nmol NADPH 定義為一個酶活力單位。
NADP-ME（U/mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10 9]÷(Cpr×V 樣) ÷T=4823×ΔA÷Cpr

1. 按細菌或細胞密度計算：

單位的定義：每 1 萬個細菌或細胞在反應(yīng)體系中每分鐘生成 1 nmol NADPH 定義為一個酶活力 單位,。
NADP-ME（U/10 4 cell）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10 9]÷(V 樣÷V 樣總×500) ÷T=9.65×ΔA,。

1. 血清中 NADP-ME 活力的計算：

單位的定義：每 mL 血清在反應(yīng)體系中每分鐘生成 1 nmol NADPH 定義為一個酶活力單位。
NADP-ME（U/mL）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10 9]÷V 樣÷T =4823×ΔA,。 V 反總：反應(yīng)體系總體積,，9×10 -4 L；ε：NADPH 摩爾消光系數(shù),，6.22×10 3L/mol/cm,；d：比色 皿光徑，1cm；V 樣：加入樣本體積,，0.03 mL,；V 樣總：加入提取液體積，1 mL,；T：反應(yīng)時間,， 1min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度,，mg/mL,；W：樣品質(zhì)量，g,；500：細菌或細胞總數(shù),，500 萬。

相關(guān)文獻：
《Understanding the stress responses of Kluyveromyces marxianus after an arrest during high-temperature ethanol fermentation based on integration of RNA-Seq and metabolite data》 作者:Xiaofen Fu,， Pengsong Li,，Lei Zhang， Shizhong Li 期刊:Applied Microbiology and Biotechnology 影響因子:3.67 PMID:30673809

NADP蘋果酸酶(NADP-ME)活性檢測試劑盒