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支原體（mycoplasma）：又稱霉形體，為目前發(fā)現(xiàn)的小的簡單的原核生物,?；驍?shù)量為480。支原體細(xì)胞中*可見的細(xì)胞器是核糖體,。

培養(yǎng)支原體的營養(yǎng)物質(zhì)要求比一般細(xì)菌高，除基礎(chǔ)營養(yǎng)物質(zhì)外還需加入10～20%人或動(dòng)物血清以提供支原體所需的膽固醇,。適pH7.8～8.0之間,，低于7.0則死亡，但解脲支原體是個(gè)例外,，它的適pH在6.0～6.5之間,。

支原體污染的來源包括工作環(huán)境的污染、培養(yǎng)基的污染,、操作者本身的污染,、污染支原體的細(xì)胞造成的交叉污染、實(shí)驗(yàn)器材帶來的污染和用來制備細(xì)胞的原始組織或器官的污染,。

分離培養(yǎng)法：

分離培養(yǎng)法是支原體檢測的金標(biāo)方法,，其檢測度高。這種方法是從可疑的細(xì)胞培養(yǎng)體系中取樣,，并接種到適宜支原體生長的瓊脂平板上,。如果樣本中含有支原體，它們就會(huì)在這種瓊脂平板上*生長,，終形成明顯可見的特征性菌落,。分離培養(yǎng)法基本不會(huì)出現(xiàn)假陰性結(jié)果，因此被譽(yù)為支原體檢測金標(biāo)準(zhǔn),。不過分離培養(yǎng)法也存在兩個(gè)弊端,，一是檢測時(shí)間太長，支原體要長出明顯克隆少需要4周時(shí)間,。二是盡管可以檢測絕大多數(shù)支原體種類,，分離培養(yǎng)法也有力所不及的時(shí)候。

如果你實(shí)在不想等這么久,，或者希望在分離培養(yǎng)法的等待過程中先拿到初步結(jié)果,，你可以試一試DNA,、PCR或酶學(xué)檢測方法。不過需要注意的是,，上述檢測方法都不能單獨(dú)檢出所有類型的支原體,，而且靈敏度也沒有分離培養(yǎng)法高，所以好結(jié)合使用兩種方法以獲得可靠的檢測結(jié)果,。

DNA檢測需要將可疑樣品與指示細(xì)胞共同培養(yǎng),，因此一般需要幾天時(shí)間。DNA檢測所用的指示細(xì)胞通常是細(xì)胞質(zhì)區(qū)域較大的Vero細(xì)胞,，如果原樣本中含有支原體,，那么當(dāng)細(xì)胞DNA被熒光染料（如Hoechst染料）染色時(shí)，就可以在指示細(xì)胞的核周圍觀察到熒光斑點(diǎn)或熒光顆粒,。分離培養(yǎng)法用來檢測支原體M. hyorhinis菌株并不可靠,，而DNA法可以準(zhǔn)確的將其檢測出來。

PCR法：

PCR法也可以檢測M. hyorhinis菌株,，PCR法檢測支原體只需幾個(gè)小時(shí),，是快但也是不靈敏的支原體檢測方法。該方法采用針對支原體DNA的引物用PCR檢測可疑樣本,，其中PCR引物通常針對支原體的16S rRNA基因,。在凝膠電泳過程中，支原體DNA會(huì)顯示為特異性條帶,，以此指示支原體的存在,。PCR法可以檢測大多數(shù)支原體，但謹(jǐn)慎起見好同時(shí)使用另一種檢測方法來進(jìn)行驗(yàn)證,。

酶學(xué)檢測和ELISA：

此外,，也還存在一些其他支原體檢測方法。例如酶學(xué)檢測是將可疑樣本添加到特定底物中,，在這一體系內(nèi)支原體的酶可以將ADP轉(zhuǎn)化為ATP,，隨后能利用ATP發(fā)光的luciferase酶就可以指示支原體的存在。ELISA也能用于支原體檢測,，以ELISA法為基礎(chǔ)的支原體檢測一般使用針對支原體16S rRNA基因的帶標(biāo)記探針或抗體,，來檢測培養(yǎng)物中是否含有支原體。

北京索萊寶科技有限公司為生化試劑供應(yīng)商,，專業(yè)生產(chǎn)銷售生化試劑,、生物試劑、細(xì)胞培養(yǎng)基,、試劑盒,、實(shí)驗(yàn)耗材等產(chǎn)品。支原體檢測試劑盒是索萊寶自產(chǎn)產(chǎn)品,，其貨號(hào)為CA1080,。支原體用普通染色法不易著色,，用姬姆薩染色很淺，革蘭氏染色為陰性,。索萊寶支原體檢測試劑盒利用熒光染料（bisbenzimide,Hoechst 33258）檢測支原體污染,。這種染料會(huì)結(jié)合到DNA的A-T富集區(qū)域，因?yàn)橹гw的DNA中A-T含量高（55％～80％）,，所以可將其染色而被檢測到,。被支原體污染的細(xì)胞經(jīng)染色后在細(xì)胞周圍可看到許多大小均一的熒光小點(diǎn)，即為支原體的DNA染色斑,，說明有支原體污染,。Hoechst 33258的大激發(fā)波長為346nm，大發(fā)射波長為460nm,；Hoechst 33258和雙鏈DNA結(jié)合后,，大激發(fā)波長為352nm，大發(fā)射波長為461nm,。