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臺盼藍(lán)染液是細(xì)胞活性染料，常用于檢測細(xì)胞膜的完整性,。細(xì)胞損傷或死亡時(shí),，臺盼藍(lán)可穿透變性的細(xì)胞膜，與解體的DNA結(jié)合,，使其著色,。而活細(xì)胞能阻止染料進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。故可以檢測細(xì)胞是否存活。

臺盼藍(lán)染色法的原理

正常的活細(xì)胞,，胞膜結(jié)構(gòu)完整,，能夠排斥臺盼藍(lán)，使之不能夠進(jìn)入胞內(nèi),；而喪失活性或細(xì)胞膜不完整的細(xì)胞,，胞膜的通透性增加，可被臺盼藍(lán)染成藍(lán)色,。通常認(rèn)為細(xì)胞膜完整性喪失,，即可認(rèn)為細(xì)胞已經(jīng)死亡，這與中性紅作用相反,。因此,，借助臺盼藍(lán)染色可以非常簡便、快速地區(qū)分活細(xì)胞和死細(xì)胞,。臺盼藍(lán)是組織和細(xì)胞培養(yǎng)中常用的死細(xì)胞鑒定染色方法之一,。注意凋亡小體也有臺盼藍(lán)拒染現(xiàn)象。臺盼藍(lán)染色后,，通過顯微鏡下直接計(jì)數(shù)或顯微鏡下拍照后計(jì)數(shù),，就可以對細(xì)胞存活率進(jìn)行比較的定量。

臺盼藍(lán)染色法的操作步驟

材料：

1,、顯微鏡,、玻片、蓋玻片,、滴管,；

2、試劑：0.4%臺盼藍(lán)染液,；

3,、臺盼藍(lán)（Trypan blue）：0.4g；

4,、生理鹽水：100ml,；

操作步驟：

1、用Hanks液配制0.1%臺盼藍(lán)溶液,；

2,、用0.5%胰蛋白酶：0.2%EDTA=1：1混合液來消化培養(yǎng)的貼壁細(xì)胞；

3,、再加入適量Hanks液制成細(xì)胞懸液,；

4、將待染色細(xì)胞稀釋所需濃度（方法及濃度范圍與細(xì)胞計(jì)數(shù)相同）,；

5,、每0.1ml細(xì)胞懸液約加新鮮配制的染液一小滴,，室溫下染3—5min；

6,、染色過的細(xì)胞材料,，取一滴細(xì)胞懸液置玻片上，加蓋玻片后放高倍鏡下觀察,；

7,、死亡的細(xì)胞著淺藍(lán)色并膨大，無光澤,?；罴?xì)胞不著色并保持正常形態(tài)，有光澤,；

8,、計(jì)數(shù)1000個細(xì)胞中的活細(xì)胞和死細(xì)胞數(shù)目；

9,、統(tǒng)計(jì)未染色細(xì)胞,。可按公式計(jì)算出細(xì)胞活率,。

（細(xì)胞活率（%）=未染色的細(xì)胞數(shù)/觀察的細(xì)胞總數(shù)×100,。）

臺盼藍(lán)染色法注意事項(xiàng)：

1、染色時(shí)間不能太長,，否則活細(xì)胞也會逐漸積累染料而染成顏色,，使監(jiān)測結(jié)果偏低。

2,、另可結(jié)合細(xì)胞計(jì)數(shù)方法,，同時(shí)進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)和活力檢測。

3,、有潛在致癌危險(xiǎn),，為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作,。

北京索萊寶科技有限公司為生化試劑供應(yīng)商，專業(yè)生產(chǎn)銷售生化試劑,、生物試劑,、細(xì)胞培養(yǎng)基、實(shí)驗(yàn)耗材等產(chǎn)品,。臺盼藍(lán)染色液為索萊寶的自產(chǎn)產(chǎn)品,，其貨號為C0040。臺盼藍(lán)（Trypan Blue)或稱臺盼蘭,、錐蟲藍(lán),，是細(xì)胞活性染料,，常用于檢測細(xì)胞膜的完整性與細(xì)胞的存活率，是組織和細(xì)胞培養(yǎng)中常用的死細(xì)胞鑒定染色方法之一,。