LB培養(yǎng)基是微生物學(xué)實驗中常用的培養(yǎng)基,,用于培養(yǎng)大腸桿菌等細菌。其分為液態(tài)或是加入瓊脂制成的固態(tài)培養(yǎng)基,。早LB培養(yǎng)基中加入抗生素還可用于大腸桿菌為宿主的克隆,。LB一般被解釋為Luria-Bertani培養(yǎng)基,然而根據(jù)其發(fā)明人貝爾塔尼(Giuseppe Bertani)的說法,這個名字來源於英語的lysogeny broth,即溶菌肉湯。
LB培養(yǎng)基的配置:
成分:
胰蛋白胨(tryptone)10g,;
酵母提取物(yeast extract)5g,;
氯化鈉(NaCl)10g;
配制方法:
(1)稱量 分別稱取所需量的胰化蛋白胨,、酵母提取物和NaCl,,置于燒杯中;
(2)溶化 加入所需水量2/3的蒸餾水于燒杯中,,用玻棒攪拌,,使藥品全部溶化;
(3)調(diào)pH 用1mol/L NaOH溶液調(diào)pH7.2,;
(4)定容 將溶液倒入量筒中,,加水所需體積;
(5)加瓊脂 加入所需量瓊脂,,加熱融化,,補足失水;
(6)分裝、加塞,、包扎,;
(7)高壓蒸汽滅菌100Pa滅菌20min;
固體培養(yǎng)基另加 瓊脂粉 15-20g,;
LB固體培養(yǎng)基1L和液體一樣,,加10g~15g瓊脂粉,一定要在溫度降下之前加好抗生素,,并且倒好板,。
LB固體培養(yǎng)基倒板:
1、配制:100mlLB培養(yǎng)基加入1~1.5g瓊脂粉
2,、抗生素的加入:高壓滅菌后,,將融化的LB固體培養(yǎng)基置于55℃的水浴中,待培養(yǎng)基溫度降到55℃時(手可觸摸)加入抗生素,,以免溫度過高導(dǎo)致抗生素失效,,并充分搖勻。
3,、倒板:一般15ml-20ml倒1個板子,。培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿后,打開蓋子,,在紫外下照10-15分鐘,。
4、保存:用封口膠封邊,,并倒置放于4℃保存,,一個月內(nèi)使用。
LB培養(yǎng)基優(yōu)點:
LB培養(yǎng)基由蛋白胨,、酵母膏,、nacl組成。先,蛋白胨是經(jīng)過胰酶處理過的蛋白,,處理后,大分子的蛋白分子量變小,,細菌更容易利用。此外,,還含有嘌呤,,提供生長因子。如要培養(yǎng)大腸桿菌,,其實用普通蛋白胨代替胰蛋白胨是沒有問題的,。蛋白胨為細菌的生長提供氮源。其次培養(yǎng)基中的酵母膏酵母提取物主要成分是氨基酸,、小肽,、核甘酸,、b族維生素、主要為細菌提供維生素和微量元素,,是細菌生長所必須的.氯化鈉在培養(yǎng)基中的作用是維持滲透壓,兼能可提供無機鹽,。
LB培養(yǎng)基與瓊脂培養(yǎng)基之間的兩大區(qū)別:
區(qū)別一:瓊脂培養(yǎng)基就是加了瓊脂粉凝結(jié)成固體的LB培養(yǎng)基。固體的培養(yǎng)基用于細菌涂板,,抗性篩選挑選單克隆之用 液體的用于單克隆菌種擴大培養(yǎng),,提取目的基因或者蛋白之用。
區(qū)別之二:就是LB培養(yǎng)基是液體的,,而營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基(牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基)是固體 具體的配方問題—— LB培養(yǎng)基的配方如下:?胰蛋白胨(Tryptone) 10g/L 酵母提取物(Yeast extract) 5g/L 氯化鈉(NaCl) 5g/L,。另外根據(jù)經(jīng)驗值用NaOH調(diào)節(jié)該培養(yǎng)基的pH,使其達到7.4,,然后來培養(yǎng)E-coli,。 營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基配方: 牛肉膏 0.3g蛋白胨 1g 氯化鈉 0.5g 瓊脂 2g 自來水 100mL pH 7.0~7.2。
北京索萊寶科技有限公司常備貨產(chǎn)品LB固體培養(yǎng)基(干粉)和LB液體培養(yǎng)基(干粉),,貨號為L1015和L1010,。LB培養(yǎng)基是分子生物學(xué)中常用的一種培養(yǎng)基,用于細菌培養(yǎng),。本公司所生產(chǎn)的LB培養(yǎng)基原料,,NaCl為國產(chǎn)分析純,胰化蛋白胨及酵母粉為進口OXOID,,酵母粉為日本進口原材料,,經(jīng)充分混勻得所。
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