蛋白質marker指的是做western時,用來參照的標準蛋白,顯示蛋白大小,用以與自己蛋白進行對比,估計蛋白大小。在免疫印跡（Western blot）試驗中,，分子量Marker雖不起眼,，但意義重大，是陽性對照,，是大小的標準,，是必須的。
蛋白marker的分類：
一. 未染色(pre mixed)蛋白分子量標準
未染色的蛋白分子量標準是簡單,，也是準確的一種,。由于沒有附帶染料分子或者是標記分子，所示大小正好是蛋白原本的大小,，是判斷蛋白大小必須的?，F(xiàn)在的marker多數(shù)都選用預混和的Marker，方便不同大小的蛋白比較,。預混的Marker通常有幾條帶加倍濃度作為指示,，因為混合的條帶越多，越不好記,，誰知道哪條是那條!數(shù)到眼都花了,。所以當看到特別濃的那幾條標志帶就記得是哪里了。不過要記得,，小帶通常都不那么容易看清楚的,。在選擇上來說，當然是選擇其中少有一條條帶和自己的目的蛋白大小相近的好,，越近越好。如果你的蛋白不幸在兩條跨度較大Marker條帶之間,，選別的Marker吧,。預混的Marker使用上不如預染Marker(pre-stained)好用，因為電泳過程中*看不到,，要和目標蛋白一起等到后染色才“開”,，無法對實驗起預示參照作用,。*屬于“后知后覺”型的，當然還是比“不知不覺”不做對照的要好,。
① 寬分子量蛋白標準
如果從實驗室總體考慮的,，就選范圍盡量寬，條帶分布比較均勻的,，這樣你的蛋白無論在哪個區(qū)間都容易判斷,，避免正好落在一段空白區(qū)的危險。不過條帶越多,，每次上樣量也就越費,。拿到Marker后，如果買的是大包裝,，就應該考慮分裝,。多次反復凍融對于蛋白的危險，不用多說吧,。另外要記得,，寬譜的Marker不一定每條都能看到的，特別是MiniCell,。如果側重大蛋白,，那小的可能就已經(jīng)跑掉了，不是質量不好哦,。
② 高分子量蛋白標準
通常在檢測大分子量蛋白經(jīng)常使用到高分子量蛋白標準,。
③低分子量蛋白marker標準
在一般的蛋白電泳當中，更常用的是低蛋白標準分子量,，除了有指示蛋白大小的作用以外,，有時還可以用作粗略的定量。實驗室用在一般蛋白電泳的低分子量蛋白標準中,。
在低分子量蛋白標準這里還包括可特別小的蛋白標準,，比如30kD以下蛋白或者多肽的分離辨別。其中GE的從2kD到16kD之間有6條帶的蛋白標準挺不錯,。
二.預染蛋白分子量標準
預染蛋白分子量是一些純化好的蛋白混合物,，通過與染料共價耦聯(lián)，在電泳過程中或者轉膜時可以直接觀察到,。預染蛋白分子量的出現(xiàn)方便了我們的實驗,，這種蛋白分子量標準可以幫助我們在電泳時、電泳后,，以及轉膜后監(jiān)測電泳情況和估計遷移率——比如,，已知垂直電泳佳分辨區(qū)域大約在膠的2/3處，如果使用預染Marker就可以預測目標蛋白進入佳分辨區(qū)時停止電泳以得到佳分辨效果;如果觀察到Marker電泳異常也可以及時終止電泳;另外在Western Blot轉膜以后可以直接觀察蛋白轉膜是否*，還可以在膜上標記蛋白分子量,，所以吸引了許多實驗室人員購買預染蛋白標準,。值得注意的是預染蛋白Marker與染料共價耦聯(lián)，所以在不同的緩沖條件下電泳時遷移特性可能會發(fā)生某些變化,，可能導致一些偏差,，所以不太適合定位蛋白——不過多數(shù)情況下Marker的條帶未必能和我們的目標蛋白*一樣，我們得到的也不過是一種相對Marker指示的參考大小,，后都需要Western來定性,，所以如果不是要區(qū)分大小相近的條帶，預染Marker還是很好用的,，而且也可以和未染色的蛋白標準一起使用,。
預染蛋白標準可以分為兩種：單色預染和多色預染，其實區(qū)別就在于幫助在實驗過程中辨認某個條帶的大小——Marker條帶越多參考價值越大,，可就越難辨認區(qū)分,，如果用不同的顏色來區(qū)別就比較好辨認啦。如果沉悶的電泳實驗中跑出五顏六色的彩虹Marker,，此時心情想必會愉快一些!單色的Marker通常是利用其中某些條帶加倍濃度來提示其大小的,。還有一點特別要注意，由于轉膜是一個將膠里的Marker濃縮在潔白的膜上,，所以需要的上樣量相對少一些,，如果想要在電泳過程中看到美麗的“彩虹”，或者單色的Marker往往需要比說明書里多加一些Marker的,。
三,、Western的蛋白分子量標準
①生物素標記蛋白標準
未染色的Marker在做Western時，需要在印跡前先用麗春紅或者是SYPRO熒光蛋白染色液等不干擾Western Blot的染色方法顯色,，在膠上做標記后才能“拼”在后的結果中,，如果是預染的Marker就要在轉膜后標記膜，或者剪膜,，后在“拼上”,。要是想直接將Marker結果顯示在后結果上，不用手工作圖或者拼接,，那就要Western的Marker了,。比如生物素標記的蛋白標準。這種方法主要是配合化學發(fā)光法：在蛋白分子量上標記生物素,，通過帶有抗生物素的抗體或者偶聯(lián)鏈親霉素的抗體,，在化學發(fā)光檢測到目的蛋白帶時就可以同時看到相應的分子量標準一起發(fā)光顯影了。不同于普通蛋白分子量標準的便宜,、預染蛋白分子量的方便,，這一方法的優(yōu)點是與Marker和目的蛋白對應性好,，同時在同張片上顯示,，不用拼接,，利于分析。缺點是如果樣品中帶有生物素背景,，那個抗生物素抗體有可能影響結果,，而且反應體系太過復雜也會干擾實驗結果。
②特殊標記蛋白標準
在經(jīng)過修飾的蛋白標準中,，除了生物素標記以外,，近些年由于下游蛋白操作的豐富化與復雜化，也出現(xiàn)帶有“尾巴”的蛋白標準,。比如His-Tag,，如果每個Marker條帶都有His–tag，那二抗添加His-Taq抗體很容易將Marker條帶顯示在Western結果上,。很方便,，問題就是有可能有潛在的干擾，比如樣品中正好有類似Histag的結構,。不過這可以通過對照檢測的,。
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