細胞凍存及復蘇的基本原則是慢凍快融，實驗證明這樣可以大限度的保存細胞活力,。目前細胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護劑,，這兩種物質(zhì)能提高細胞膜對水的通透性，加上緩慢冷凍可使細胞內(nèi)的水分滲出細胞外,，減少細胞內(nèi)冰晶的形成,，從而減少由于冰晶形成造成的細胞損傷。復蘇細胞應采用快速融化的方法，這樣可以保證細胞外結(jié)晶在很短的時間內(nèi)即融化,，避免由于緩慢融化使水分滲入細胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對細胞造成損傷,。
細胞凍存是細胞培養(yǎng)、引種,、保種和保證實驗順利進行的重要技術(shù)手段,。在細胞建株和建系中，及時凍存原始細胞是十分重要的,。在雜交瘤單克隆抗體的制備過程中,，雜交瘤細胞、每次克隆化得到的亞克隆細胞的凍存保種常常是*的實驗操作,。因為在沒有建立一個穩(wěn)定的細胞系或穩(wěn)定分泌抗體的細胞系的時候,，細胞的培養(yǎng)過程中隨時可能因細胞的污染、分泌抗體能力的喪失或遺傳變異等導致實驗失敗,，如果沒有原始細胞的凍存,，則因為上述的意外而前功盡棄。
1常用凍存液組成成分
20％血清（FBS）,、10％DMSO,、70％1640培養(yǎng)液；或90％血清（FBS）,、10％DMSO,，更可防止細胞內(nèi)冰晶形成。將DMSO和FBS加入DMEM中,，各自含量占總體積的10%,，然后濾膜過濾后分裝保存?zhèn)溆谩?/SPAN>
2DMSO在凍存液中的作用
DMSO在4℃時對細胞無明顯毒性，分子量小,、溶解度大,、易透過細胞膜，降低細胞外未結(jié)冰溶液中溶質(zhì)濃度,，使細胞免受高濃度溶質(zhì)的損傷,細胞內(nèi)水分也不會過分外滲,，避免了細胞過分脫水皺縮；DMSO與水分子結(jié)合,，可使冰點下降,，減少細胞內(nèi)冰晶的形成，從而減少冰晶損傷,。
3注意事項
1.DMSO 不用高壓滅菌,；DMEM不能高溫高壓滅菌，可以過濾除菌,。
2.DMSO要用新的,，而且要避光保存,。
3.DMSO：含10%FBS的DMEM=1:9(體積比)。
北京索萊寶科技有限公司生產(chǎn)的通用細胞凍存液貨號為24800,，以進口FBS,、DMSO為主要原材料配制，適用于各種哺乳動物原代細胞,，傳代細胞系和雜交瘤細胞等的凍存保種,。,本產(chǎn)品為即用型試劑，儲存穩(wěn)定,，使用方便,，細胞存活率高,。
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