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PAGE凝膠快速銀染試劑盒

貨號(hào): G7210
規(guī)格: 1L
保存: 室溫(15℃-25℃) 干燥保存,，復(fù)檢期12個(gè)月,。

試劑盒內(nèi)容： G7210
硝酸銀       2g
染色液A      100ml
顯色液B      100ml
顯色液C      100ml
終止液D      100ml

注：1L 規(guī)格指可配制的硝酸銀染色液的體積，實(shí)際使用次數(shù)根據(jù)PAGE 膠大小不同而不同,。
產(chǎn)品簡(jiǎn)介:
核酸銀染的原理是銀離子可與核酸形成穩(wěn)定的復(fù)合物,，然后用還原劑如甲醛在堿性環(huán)境下使Ag+還原成銀
顆粒,，可把核酸電泳帶染成黑褐色。它主要用于聚丙烯酰胺凝膠電泳染色,。其靈敏度比EB 高200 倍，該產(chǎn)品
整個(gè)過(guò)程只需要20 分鐘,，操作簡(jiǎn)單,，靈敏度高，能檢測(cè)到10ng 以下的DNA 條帶,。
操作步驟:
一,、染色液配制
需要配制的染色液體積根據(jù)PAGE 膠的大小而定，一般的mini-PAGE 膠需要20-30mL,。配制用的器皿清洗
干凈后用去離子水涮洗,，染色液須用去離子水配制，現(xiàn)用現(xiàn)配,。如果配制的溶液體積不是100mL,，可以按比例
改變各成分用量。
1,，硝酸銀染液：稱(chēng)取0.2g 硝酸銀,，加入到90ml 去離子水中*溶解，加入10ml 溶液A 混勻,，現(xiàn)用現(xiàn)配,。
2，顯色液：分別取溶液B 和溶液C 各10ml 加入80ml 去離子水中混勻,，現(xiàn)用現(xiàn)配,。
3，終止液：取終止液D 10ml 加去離子水稀釋100ml,，現(xiàn)用現(xiàn)配,。
二、染色：
1,，PAGE 電泳結(jié)束后,，將PAGE 蛋白膠轉(zhuǎn)移玻璃平皿或搪瓷盤(pán)中，用去離子水漂洗兩遍,，每次2min,。
2，將PAGE 膠轉(zhuǎn)移硝酸銀染液中,，使染液沒(méi)過(guò)PAGE 膠,，室溫染色10min?？芍糜趽u床上緩慢搖晃,，使
其染色均勻,。
3，棄去染色液,，用去離子水快速漂洗三次,，每次半分鐘。
4,，將PAGE 膠轉(zhuǎn)移顯色液中,，使顯色液沒(méi)過(guò)PAGE 膠，室溫?fù)u晃顯色條帶清晰可見(jiàn),。
5,，可選，將PAGE 膠轉(zhuǎn)移終止液中,，終止顯色1min,。
6，銀染后PAGE 膠可拍照保存或用于后續(xù)試驗(yàn),。
注意事項(xiàng)：
1. 銀染主要出現(xiàn)在PAGE 膠的表面,，使用薄膠（0.5-0.75mm）可以提高靈敏度。
2. 對(duì)于考馬斯亮藍(lán)染色的SDS-PAGE 膠,，可用甲醇將膠漂洗后,，繼續(xù)進(jìn)行銀染?？既具^(guò)程中的乙酸會(huì)干擾銀染,，因此要確保將PAGE 凝膠中殘留的乙酸*洗凈。
3. 不同蛋白質(zhì)對(duì)銀染的反應(yīng)是不一樣的,，尤其是堿性蛋白染色效果差,。因此，不宜用銀染測(cè)定不同蛋白
的比例,。
4. 染色過(guò)程中,，緩慢的振蕩是必要的，一般選擇40-60 rpm.
5. 凝膠表面的裂紋多是由于壓力,、手印及表面干燥所致,，所以全程中都應(yīng)帶手套操作。
6. PAGE 凝膠背景呈均一的黑色多是水中的雜質(zhì)引起的,，所以溶液的配制應(yīng)使用電導(dǎo)率小于1 μS 的去離
子水,。
7. 如果染色后有呈灰塵或煙霧狀灰色或棕色的沉淀出現(xiàn)在凝膠表面，可能是在幾步漂洗過(guò)程中洗得不夠
*,，或是染色過(guò)程時(shí)溫度太低,。
8. 較深的銀染背景多是丙烯酰胺中的雜質(zhì)所致。
9. PAGE 膠中的甘油,、尿素,、甘氨酸,、Triton X-100 和兩性電解質(zhì)這些物質(zhì)會(huì)干擾銀染。
10. 室溫操作時(shí),，溫度的波動(dòng)往往會(huì)干擾銀染的效果,，恒溫水浴可以解決這個(gè)問(wèn)題。
11. 憑借戊二醛預(yù)處理可以使各種蛋白質(zhì)的染色提高40 倍,。
12. 染色使用的玻璃器皿必須非常干凈,，用酸浸泡可以滿(mǎn)足要求。
13. 銀染應(yīng)盡快照相,，隨著時(shí)間延長(zhǎng)，蛋白條帶會(huì)變淺,，而背景會(huì)加深,。
14. 銀染容器理想的是玻璃平皿，其次是搪瓷盤(pán)和密胺塑料盤(pán)等,。
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