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通用細(xì)胞凍存液的操作

閱讀:617      發(fā)布時間:2024-5-14
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細(xì)胞凍存是細(xì)胞培養(yǎng),、引種、保種和保證實驗順利進(jìn)行的重要技術(shù)手段,。在細(xì)胞建株和建系中,,及時凍存原始細(xì)胞是十分重要的。在雜交瘤單克隆抗體的制備過程中,,雜交瘤細(xì)胞,、每次克隆化得到的亞克隆細(xì)胞的凍存保種常常是不可少的實驗操作。因為在沒有建立一個穩(wěn)定的細(xì)胞系或穩(wěn)定分泌抗體的細(xì)胞系的時候,,細(xì)胞的培養(yǎng)過程中隨時可能因細(xì)胞的污染,、分泌抗體能力的喪失或遺傳變異等等導(dǎo)致實驗失敗,如果沒有原始細(xì)胞的凍存,,則因為上述的意外而前功盡棄,。通用細(xì)胞凍存液可用于培養(yǎng)細(xì)胞的凍存。

通用細(xì)胞凍存液的使用步驟:

1,、培養(yǎng)細(xì)胞至對數(shù)生長晚期,,顯微鏡觀察其外觀、形態(tài),、有無污染等,,取狀態(tài)良好的細(xì)胞進(jìn)行凍存操作。

2,、離心,,棄上清。

3,、加入適量的通用細(xì)胞凍存液,,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1~10×106/ml,,置于凍存管中,,密閉、不要擰的太緊,,避免彎曲變形,。

4、一般遵循1℃/min的速率進(jìn)行冷凍,。亦可采用4℃ 20min,,-20℃ 30min,-70℃過夜,,然后置于液氮罐中長期存儲,。

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