蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn),，常稱之為蛋白Marker。在免疫印跡（Western blot）試驗中,，分子量Marker雖不起眼,，但意義重大，是陽性對照,，是大小的標(biāo)準(zhǔn),，是必須的。只有Marker精確無誤了,，實驗結(jié)果才有說服力,。除此之外，蛋白Marker還能夠提示電泳是否正常,，轉(zhuǎn)移是否成功等信息,。
光陰似箭，日月如梭,，不知不覺中蛋白Marker經(jīng)歷了普通Marker,、預(yù)染Marker和曝光Marker三個發(fā)展階段。
1.0代產(chǎn)品：普通蛋白Marker
普通蛋白Marker,，或稱之為未染色蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn),，也叫預(yù)混（pre mixed）蛋白分子量Marker,，是簡單，也是最準(zhǔn)確的一種,。由于沒有附帶染料分子或者是標(biāo)記分子,，所示大小正好是蛋白原本的大小，是早期精確判斷蛋白大小的產(chǎn)品,。普通Marker多數(shù)都選用預(yù)混和的Marker,，方便不同大小的蛋白比較。預(yù)混的Marker通常有一個或者幾個條帶加倍濃度作為區(qū)別,，用于幫助判斷每個條帶的大小,。在選擇上來說，當(dāng)然是選擇其中至少有一條條帶和自己的目的蛋白大小相近的,，越近越好,。普通Marker不如預(yù)染Marker好用，因為電泳過程中看不到,，要和目標(biāo)蛋白一起等到最后染色才能見真容,，無法對實驗過程起預(yù)示參照作用。屬于“后知后覺"型的,，當(dāng)然還是比“不知不覺"不做對照的要好。按照條帶的分子量大小通常有三種：寬分子量蛋白Marker,、高分子量蛋白Marker,、低分子量蛋白Marker。
從實驗總體考慮的,，應(yīng)該選范圍盡量寬,，條帶分布比較均勻的，這樣你的蛋白無論在哪個區(qū)間都容易判斷,，避免正好落在一段空白區(qū)的風(fēng)險,。不過，條帶越多,，價格可能也會越貴,。如果買的是大包裝，就應(yīng)該考慮分裝,。要考慮到反復(fù)凍融對蛋白的傷害,，不能因為實驗虐我，我就虐蛋白吧,。另外要知道,，寬譜的Marker不一定每條都能看到的，特別是Mini Cell,。還有,，如果側(cè)重大蛋白,，那小的可能就已經(jīng)跑掉了，跟質(zhì)量無關(guān),。
在一般的蛋白電泳當(dāng)中,，低分子量Marker（PR1400）使用較多，除了有指示蛋白大小的作用以外,，有時還可以用作粗略的定量,。還有一類特別小的蛋白Marker，比如用于30kD以下蛋白或者多肽的,。其中GE的從2kD到16kD之間有6條帶的蛋白Marker挺不錯,，另外提醒一句，特別小的蛋白Marker條帶如果要顯色漂亮,，上樣量一定要足夠,。
2.0代產(chǎn)品：預(yù)染蛋白Marker
預(yù)染蛋白分子量（prestained Marker），也叫預(yù)染Marker,，是將Marker的蛋白,，通過與染料共價耦聯(lián)，在電泳過程中或者轉(zhuǎn)膜時可以肉眼直接觀察到的一種蛋白分子量Marker,。預(yù)染Marker帶來了很多方便,，可以幫助我們在電泳時、電泳后,，以及轉(zhuǎn)膜后監(jiān)測電泳情況和估計遷移率,。比如，已知垂直電泳最佳分辨區(qū)域大約在膠的2/3處,，如果使用預(yù)染Marker就可以預(yù)測目標(biāo)蛋白進(jìn)入最佳分辨區(qū)時停止電泳以得到最佳分辨效果,；如果觀察到Marker電泳異常也可以及時終止電泳。另外在Western Blot轉(zhuǎn)膜以后可以直接觀察蛋白轉(zhuǎn)膜是否完成,。Marker和染料一同轉(zhuǎn)移到膜上,，可以方便的用來對照顯色后的目標(biāo)蛋白大小。預(yù)染Marker有這么多優(yōu)點,，所以現(xiàn)在應(yīng)用的很多,。值得注意的是，預(yù)染蛋白Marker與染料共價耦聯(lián),，在不同的緩沖條件下電泳時遷移特性可能會發(fā)生某些變化,，可能會導(dǎo)致一些偏差，所以不太適合精確定位蛋白,。如果拋開分子量的偏差,，預(yù)染Marker還是很好用的，也可以和普通Marker一起使用，做精確對比,。 預(yù)染Marker可以分為兩種：單色預(yù)染和多色預(yù)染（又稱為彩虹Marker）,。單色的Marker通常是利用其中某些條帶加倍濃度來提示其大小的，觀察起來不是很方便,。彩虹Marker（PR1910）,，比較容易區(qū)分條帶的大小。還有一點特別要注意,，由于轉(zhuǎn)膜是一個將膠里的Marker轉(zhuǎn)印膜上,，所以需要的上樣量相對少一些。如果想要在電泳過程中看到美麗的“彩虹"或者漂亮的單色Marker,，往往需要比說明書里多加一些Marker的,。省錢與美麗，背道而馳,。
2.5代產(chǎn)品：間接曝光Marker
普通Marker和預(yù)染Marker還有一個缺點就是不能夠在最終Western曝光的膠片或者掃描照片中顯色,，最終判斷Western結(jié)果，還需要將照片和膜進(jìn)行比對,，容易出現(xiàn)偏差或者錯誤,。很多產(chǎn)品在向最終的顯色做努力，Biorad的Precision Plus Protein WesternC 就是其中的一例,。該產(chǎn)品的所有條帶都含有 Strep-標(biāo)簽,，當(dāng)使用 StrepTactin-HRP時可被化學(xué)發(fā)光檢測最終顯示在凝膠轉(zhuǎn)印膜膠片或 CCD 圖像中。這個好像有些復(fù)雜,，需要輔助另外的產(chǎn)品,，或者多余的步驟，我們就把該類產(chǎn)品定義為蛋白Marker的第2.5代產(chǎn)品,，或者叫做的蛋白Marker 2S吧（apple手機(jī)的命名規(guī)則）。
3.0代產(chǎn)品：曝光Marker
說了這么多,，大家也明白了蛋白Marker的第三代產(chǎn)品是什么樣子的,。3.0版本的蛋白Marker，就是最終的Marker條帶會和檢測目標(biāo)蛋白會一同出現(xiàn)在顯色的圖片中,，我們又稱之為曝光Marker（Exposure Marker）,。曝光Marker的原理是，每個條帶蛋白都含有IgG結(jié)合位點,，可以與人,、小鼠、大鼠,、山羊,、綿羊以及兔子來源的IgG恒定區(qū)結(jié)合，因此在實驗過程中這些蛋白可以直接或間接地結(jié)合二抗，與實驗樣品信號同時在X膠片上曝光顯色,。由此可以更方便準(zhǔn)確地判斷實驗樣品信號的位置和大小,。
曝光Marker克服了使用常規(guī)預(yù)染 Marker評估蛋白轉(zhuǎn)膜效率和樣品抗原信號時所存在的一些不足。這些不足主要表現(xiàn)為：1,、預(yù)染marker經(jīng)過化學(xué)修飾后分子量與SDS-PAGE上表現(xiàn)的遷移率不一致,；2、預(yù)染marker無法在X光膠片上顯色,，X光膠片上顯色的條帶需要與轉(zhuǎn)移到膜上的預(yù)染 Marker比對才能確認(rèn)蛋白的位置和大小,，整個過程比較繁瑣同時容易造成誤差甚至是錯誤。3,、也是最重要的一點,，目的條帶和曝光Marker出現(xiàn)在同一圖片中，而不是后期的拼接,，這樣的結(jié)果更讓別人信賴?，F(xiàn)在很多大文章都在使用曝光Marker，可以預(yù)見,，以后文獻(xiàn)上逐漸都會使用曝光Marker,。
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