干細胞是一種未充分分化,，具有自我復(fù)制能力的多潛能細胞，在一定誘導條件下,，可以分化為成骨細胞,、成軟骨細胞和成肌細胞等，還可以分化為巨噬細胞,、脂肪細胞,、內(nèi)皮細胞和成纖維細胞等骨髓基質(zhì)細胞，具有發(fā)育為骨,、軟骨,、脂肪、肌肉,、真皮及骨髓基質(zhì)等中胚層組織的潛能,。
簡言之，干細胞體外定向誘導分化就是選擇適當?shù)恼T導劑和誘導方法,，通過誘導劑與細胞表面受體結(jié)合或使細胞發(fā)生輕度可逆性損傷等,，使被誘導細胞按預(yù)定的細胞類型方向分化，然后將這些定向分化的細胞進行分離和培養(yǎng)傳代,，從而得到人們所需要的細胞類型,。一般的,，成骨分化和成脂分化是間充質(zhì)干細胞MSC必要的功能性鑒定指標。成骨分化經(jīng)茜素紅染色法鑒定,，成脂分化經(jīng)油紅O染色法鑒定,。
Solarbio新增了成骨/成脂誘導迷你化合物Kit，每種Kit均由對應(yīng)種類經(jīng)典的可用于誘導的基礎(chǔ)試劑,、用于鑒定與分析的高品質(zhì)染料以及相關(guān)試劑組成,，具有良好的生物活性?？蛻粢部梢愿鶕?jù)自己的實驗需求刪減或添加其他的化合物,，也可靈活定制專屬Kit，所有組分均已經(jīng)過NMR,、HPLC或MS檢測,，以確保化合物純度和準確性,。
產(chǎn)品說明
IK-OIN-1 | 成骨誘導小分子化合物Kit |
IK-LIN-1 | 成脂誘導小分子化合物Kit |
基本操作（僅供參考）
1. 接種骨髓間充質(zhì)干細胞
取對數(shù)生長期的細胞,，按照2×104cells/cm2的細胞密度接種至包被后的培養(yǎng)器皿中，于37℃,，5% CO2培養(yǎng)環(huán)境下培養(yǎng)至相應(yīng)的融合度（成骨誘導：60~70%,；成脂誘導：90~100%），棄掉上清,，加入成骨誘導分化培養(yǎng)基（含有地塞米松,、維生素C、茜素紅等）或成脂誘導分化培養(yǎng)基（含有地塞米松,、胰島素,、吲哚美辛和IBMX）。
2. 細胞分化誘導
成骨誘導：每2~3天更換誘導培養(yǎng)基,，于37℃,，5%CO2培養(yǎng)環(huán)境下培養(yǎng)，并注意觀察細胞形態(tài)變化（一般約14~28天左右）,。根據(jù)細胞鈣鹽結(jié)晶析出和鈣質(zhì)結(jié)節(jié)形成的情況,，決定終止細胞誘導的時間，進行后續(xù)固定和染色鑒定（茜素紅染色）,。
成脂誘導：于37℃,，5%CO2培養(yǎng)環(huán)境下培養(yǎng)約2~3天，更換為成脂誘導分化培養(yǎng)基維持液（只含有胰島素）培養(yǎng)1天,。按照以上換液頻率繼續(xù)誘導（一般是3個循環(huán),，約14天左右），并注意觀察細胞形態(tài)變化,。根據(jù)細胞誘導形成的脂滴數(shù)量和大小,，決定終止細胞誘導的時間,，并進行后續(xù)固定和染色鑒定（油紅O染色）。
3. 細胞固定
吸去培養(yǎng)基,，使用適量1×PBS清洗一次,，棄去后取適量4%中性甲醛溶液覆蓋培養(yǎng)器皿底面，室溫固定30~60 min,，棄去固定液再使用1×PBS清洗兩次,。
4. 染色鑒定
加入適量的染色工作液，染色合適的時間（茜素紅：3~5min,；油紅O：靜置染色30min），吸去染液,，用1×PBS清洗兩次,，并加入適量1×PBS避免細胞干燥。
5. 誘導評估與分析
顯微鏡下觀察染色效果,，并進行圖像采集和誘導評估,。誘導成功時，成骨誘導后的鈣質(zhì)結(jié)節(jié)會與茜素紅染料結(jié)合后呈現(xiàn)紅色或橘紅色,。成脂誘導后的脂滴會與油紅O染料結(jié)合后呈現(xiàn)紅色或橘紅色,。
對于成骨誘導還可以進行半定量分析，上述顯微觀察結(jié)束后,，棄上清,，加入氯化十六烷基吡啶溶液，室溫下孵育15~60min溶解礦化結(jié)節(jié)（茜素紅）,，然后在562 nm處檢測上清的OD值,。
更多產(chǎn)品
套裝貨號 | 套裝名稱 | 套裝說明 |
IK-CEA-1 | 細胞激活Kit-1 | 本套裝內(nèi)含1000×PMA(81μM)、Ionomycin(1.34mM),、Brefeldin A(2mM)的DMSO溶液和Monensin(10.6mM)的EtOH溶液各一支,，每支溶液100μL。 |
IK-HIF-1 | 缺氧小分子 化合物Kit-1 | 本套裝精選了數(shù)種靶向HIF/HIF Prolyl-Hydroxylase的化合物,，可用于細胞氧感應(yīng)相關(guān)的研究,，例如：缺氧、氧化應(yīng)激等,。 |
IK-ADC-1 | 抗糖尿病小分子 化合物Kit-1 | 本套裝精選了數(shù)種經(jīng)典的,、具有良好生物活性的糖尿病相關(guān)化合物，可用于探索糖尿病的相關(guān)研究,。 |
IK-CA-2 | 腫瘤小分子 化合物Kit-2 | 本套裝精選了數(shù)種抗腫瘤化合物和具有促腫瘤活性的化合物,，可用于黑色素瘤、骨髓瘤,、淋巴瘤,、非小細胞肺癌和乳腺癌等相關(guān)研究,。 |
IK-TNF-1 | 腫瘤壞死因子TNF小分子化合物Kit-1 | 本套裝精選了數(shù)種靶向腫瘤壞死因子TNF的化合物，可用于抗腫瘤的相關(guān)研究,。 |
IK-PD-1 | 帕金森小分子 化合物Kit-1 | 本套裝精選了數(shù)種靶向多巴胺受體,、腺苷受體、腎上腺素受體及單胺氧化酶等,，可用于帕金森的相關(guān)研究,。 |
IK-AD-1 | 阿茲海默癥小分子 化合物Kit-1 | 本套裝精選了數(shù)種靶向Amyloid-β等受體的化合物，可用于阿茲海默癥的相關(guān)研究,。 |
IK-AB-1 | 常用抗生素小分子化合物Kit-1 | 本套裝精選了數(shù)種實驗室常備的抗生素,，可用于鑒定藥物靶標的相關(guān)研究。 |
G1450 | 茜素紅S染色液(0.2%,，pH8.3) | 茜素紅S染色液由緩沖液配制,，適合組織和細胞的鈣鹽染色，pH8.3更適用于培養(yǎng)細胞的鈣鹽染色,，鈣鹽處有橘黃色或橘紅色沉積,，顏色強度取決于鈣鹽含量。 |
G1262 | 油紅O染色試劑盒(細胞專用) | 本試劑盒適用于細胞誘導脂滴染色,，可顯示最小的脂滴,，可優(yōu)先為脂類從溶劑中吸附染料。標本不采用含有乙醇的固定液,，如需要固定可采用10%福爾馬林,。脂肪陽性染色結(jié)果呈橘黃至紅色，但具體顏色因脂質(zhì)濃度而定,。 |
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