操作步驟
1
分別設(shè)定標(biāo)準(zhǔn)孔,、0孔和樣本孔，計(jì)算好當(dāng)次試驗(yàn)所需要的板條數(shù)量,，將不需要的板條拆卸下來(lái),，用新的封板膜重新封好，放回裝有干燥劑的鋁箔袋,。
2
浸泡酶標(biāo)板：加入300 μL 1×洗滌液靜置浸泡30秒,，棄掉洗滌液之后，在吸水紙上將微孔板拍干,，重復(fù)2次,。
提示：洗板完成之后，請(qǐng)立即使用微孔板,，不要讓微孔板干燥,。
3
加標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品孔加入100 μL的2倍倍比稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品。0孔加入100 μL標(biāo)準(zhǔn)品/樣本稀釋液,。
4
加樣本：樣本孔加入100 μL的待測(cè)樣本,。保證連續(xù)加樣,，不要間斷。加樣過(guò)程在10 min內(nèi)完成,。
5
孵育：使用新的封板膜封板,。37℃靜置孵育90 min。
6
洗滌：棄掉液體,，每孔加入300 μL洗液洗板,，洗滌4次。每次洗板,，在吸水紙上拍干,。
提示：為獲得理想的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，必須干凈移除殘留液體,。洗板完成之后,，請(qǐng)立即進(jìn)行下步操作，不要讓微孔板干燥,。
7
加生物素化檢測(cè)抗體：加入100 μL生物素化抗體工作液至反應(yīng)孔中,。
8
孵育：使用新的封板膜封板。37℃靜置孵育60 min,。
9
洗滌：棄掉液體,，每孔加入300 μL洗液洗板，洗滌4次,。每次洗板,，在吸水紙上拍干。
提示：為獲得理想的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,，必須干凈移除殘留液體,。洗板完成之后，請(qǐng)立即進(jìn)行下步操作,，不要讓微孔板干燥,。
10
加酶結(jié)合物：加入100 μL酶結(jié)合物工作液至反應(yīng)孔中。
11
孵育：使用新的封板膜封板,。封板后于37℃靜置孵育30 min,。
12
洗滌：棄掉液體，每孔加入300 μL洗液洗板,，洗滌5次,。每次洗板，在吸水紙上拍干,。
提示：為獲得理想的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,，必須干凈移除殘留液體。洗板完成之后,，請(qǐng)立即進(jìn)行下步操作,，不要讓微孔板干燥,。
13
加底物顯色：每孔加入100 μL顯色底物TMB，避光,，37℃避光顯色15 min,。
提示：可根據(jù)實(shí)際顯色情況酌情縮短或延長(zhǎng)顯色時(shí)間，但不可超過(guò)30 min,。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)孔顏色出現(xiàn)明顯梯度時(shí)（標(biāo)準(zhǔn)孔的前4孔出現(xiàn)明顯的藍(lán)色梯度,，后3~4孔不明顯），即可終止,。提前15 min打開(kāi)酶標(biāo)儀預(yù)熱,。
14
加終止液：每孔加入50 μL終止液，終止液加入的順序應(yīng)盡量與顯色底物加入的順序相同,。
提示：終止液加入后微孔板內(nèi)液體的顏色由藍(lán)色變?yōu)辄S色,。如果顏色呈現(xiàn)綠色或者顏色的變化明顯不均勻，請(qǐng)輕輕叩擊板框,，水平充分混勻。
15
檢測(cè)讀數(shù)：在5 min之內(nèi),，使用酶標(biāo)儀進(jìn)行雙波長(zhǎng)檢測(cè),，測(cè)定450 nm最大吸收波長(zhǎng)和630 nm參考波長(zhǎng)下的OD值。
提示：校準(zhǔn)后的OD值為450 nm的測(cè)定值減去630 nm的測(cè)定值,。（注：630 nm OD值為酶標(biāo)板材質(zhì)吸收值,。若不能進(jìn)行雙波長(zhǎng)檢測(cè)，可只測(cè)定450 nm波長(zhǎng)下的OD值,，但數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確度會(huì)降低一些）
注意事項(xiàng)：
檢測(cè)之前請(qǐng)將所有的試劑,、樣本平衡至室溫。
樣本復(fù)融后若有沉淀,，需再次離心,，取上清檢測(cè)。
試劑或樣本配制時(shí),，需充分混勻并盡量避免起泡,。
標(biāo)曲和樣本建議做復(fù)孔檢測(cè)。
檢測(cè)實(shí)驗(yàn)操作前,，準(zhǔn)備好所有需要的試劑及工作濃度的標(biāo)準(zhǔn)品,。
(空格分隔,最多3個(gè),單個(gè)標(biāo)簽最多10個(gè)字符)
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