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　　ELISA試劑盒夾心法和間接法操作方法介紹:
 

　　用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法:
 

　　1,、包被：用0.05M PH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml,，4℃過夜,。次日，棄去孔內(nèi)溶液,，用洗滌緩沖液洗3次,，每次3分鐘。(簡稱洗滌,，下同),。
 

　　2、加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,，置37℃孵育1小時,。然后洗滌。(同時做空白孔,，陰性對照孔及陽性對照孔),。
 

　　3、加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中,，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml,。37℃孵育0.5～1小時，洗滌,。
 

　　4,、加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,，37℃10～30分鐘。
 

　　5,、終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml,。
 

　　6、結(jié)果判定：可于白色背景上,，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,，陽性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無色或極淺,，依據(jù)所呈顏色的深淺,，以“+”、“-”號表示,。也可測O·D值：在ELISA試劑盒檢測儀上，于450nm(若以ABTS顯色,，則410nm)處,，以空白對照孔調(diào)零后測各孔O·D值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,，即為陽性,。
 

　　用于檢測未知抗體的間接法：
 

　　用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg/ml，每孔加0.1ml,，4℃過夜,。次日洗滌3次。加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時,洗滌,。(同時做空白,、陰性及陽性孔對照)于反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體(抗抗體)0.1ml,，37℃孵育30-60分鐘,，洗滌,zui后一遍用DDW洗滌。其余步驟同“雙抗體夾心法”的4,、5,、6。