丙酮酸測定試劑盒的測定步驟:
1,、 分光光度計預(yù)熱30min 以上,,調(diào)節(jié)波長至520nm,蒸餾水調(diào)零,。
2,、取300μL 樣本+100μL 試劑一于1.5mL EP 管中,混勻,,靜置2min,,加入500μL 試劑二,混勻,,于520nm波長處測定管吸光值A,。
丙酮酸的計算方法:
1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測定回歸方程為y = 0.0466x + 0.0675,; x 為丙酮酸含量(µg/mL),,y 為吸光值。
2,、按照血清(漿)體積計算
丙酮酸含量(μg/mL)= [(A-0.0675)÷0.0466×V1]÷(V3×V1÷V2)=214.6×(A-0.0675)
3,、按照蛋白濃度計算
丙酮酸含量(μg/mg prot)=[(A-0.0675)÷0.0466×V1]÷(V1×Cpr)=21.46×(A-0.0675) ÷Cpr
4、按照樣品質(zhì)量計算
丙酮酸含量(µg/g 鮮重)= [(A-0.0675)÷0.0466×V1]÷(W ×V1÷V2)=21.46×(A-0.0675) ÷W
5,、按照細菌或細胞密度計算
丙酮酸含量(μg/104 cell)=[(A-0.0675)÷0.0466×V1]÷(500×V1÷V2)=0.043×(A-0.0675)
V1:加入反應(yīng)體系中樣本體積,,0.3mL;V2:加入提取液體積,,1 mL,;V3:加入血清(漿)體積,0.1 mL,;
Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g,;500:細菌或細胞總數(shù),,500 萬。
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